[发明专利]一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液及其提取方法

权利要求书

1.一种大豆种子基因组DNA的提取方法，所述提取方法包括细胞裂解过程以及纯化DNA的过程，其特征在于：

所述细胞裂解过程为：将获取的大豆种子细粉与细胞裂解液混匀，其中，每1ml细胞裂解液混合0.08～0.1g大豆种子细粉，然后置于55～65℃水浴至少60分钟，然后离心取上清液；

所述细胞裂解液为0.02g/ml的SDS，0.05mol/L的Tris-HCl，0.05mol/L的EDTA，以及0.15mol/L的NaCl的纯水溶液；所述细胞裂解液的pH值为8；

所述的纯化DNA的过程包括以下步骤：

步骤1，取所述细胞裂解获得的上清液，向其中加入等体积的氯仿和异戊醇的混合液，所述氯仿和异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1，充分混匀后离心取上清液；

步骤2，向步骤1获得上清液加入等体积的所述氯仿和异戊醇的混合液，充分混匀后离心取上清液；

步骤3，向步骤2获得的上清液加入2.5倍体积的无水乙醇，于-20℃静置后离心，弃上清，取沉淀；

步骤4，向步骤3的沉淀加入70％的乙醇洗涤，离心弃上清，取沉淀，重复洗涤一次，晾干；

步骤5，向步骤4获得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀，再加入RNA酶，混匀，37℃培育30分钟；

步骤6，向步骤5获得的混合液中加入等体积的氯仿和异戊醇的混合液，所述氯仿和异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1，充分混匀后离心取上清液；

步骤7，向步骤6所获得的上清液中加入2.5倍体积的无水乙醇，于-20℃静置后离心，弃上清，取沉淀；

步骤8，向步骤7的沉淀加入70％的乙醇洗涤，离心弃上清，取沉淀，重复洗涤一次，晾干；

步骤9，向步骤8获得的沉淀加入TE溶液溶解沉淀，-20℃保存。

2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：

所述大豆种子细粉为通过80目筛的细粉。

3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步骤1、步骤2和步骤6中，所述离心的条件为12000～14000转/分钟，常温下离心10-20分钟。

4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步骤4和步骤8中，所述离心的条件为10000～12000转/分钟，4℃下离心5-10分钟。

5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：

在所述步骤3和步骤7中，加入无水乙醇后，于-20℃静置30分钟以上，再在4℃下，12000-16000转/分钟离心10-20分钟。