[发明专利]半固体筛选培养基及其制备方法和应用

权利要求书

1.半固体筛选培养基，其特征在于，包括如下体积份数的组分：

2.根据权利要求1所述的半固体筛选培养基，其特征在于，所述Eu3+微球标记的抗原溶液中Eu3+微球与抗原的质量比为0.02～1：1。

3.根据权利要求1所述的半固体筛选培养基，其特征在于，包括如下体积份数的组分：

4.根据权利要求1所述的半固体筛选培养基，其特征在于，所述甲基纤维素半固体培养基由按照体积比为1：1的2×DMEM培养基和4％的甲基纤维溶液充分混匀得到。

5.权利1-4任一项所述的半固体筛选培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)按上述体积比配置甲基纤维素半固体培养基；

2)按上述体积比将50×HAT溶液、胎牛血清、100×青霉素和链霉素的双抗溶液、1000×EGF溶液、1000×IL-6溶液混合均匀、100×B细胞刺激因子溶液和100×Eu3+微球标记的抗原溶液混合均匀，得混合物；

3)将步骤1所述甲基纤维素半固体培养基与步骤2)所述混合物混合均匀得半固体筛选培养基。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤2)混合的温度为4℃，混合的时间为6～24h；步骤3)中混合的温度为4℃。

7.权利1-4任一项所述的半固体筛选培养基在抗原抗体检测中的应用。

8.利用权利1-4任一项所述的半固体筛选培养基筛选杂交瘤细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将淋巴细胞和小鼠骨髓瘤进行细胞融合后，用HAT液体培养基将融合后的细胞重悬得到细胞悬液；

2)将步骤1)所述细胞悬液加到预热至35℃～38℃的半固体筛选培养基中混匀，静置并排除气泡后倒入平皿中，置于孵育箱中培养；

3)步骤2)中平皿长出肉眼可见克隆集落时，时间分辨荧光仪下，用365nm波长的激发光激发，在200-300ms后用615nm波长下观察，有红色荧光的即为分泌针对目标抗原抗体的阳性克隆，并做好标记；

4)将步骤3)已标记的阳性克隆挑出，所述阳性克隆即为杂交瘤细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述HAT液体培养基由如下成分组成：1×DMEM培养基、20％的胎牛血清和1×HAT。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述筛选方法还包括步骤：

5)对步骤4)挑出的已标记的阳性克隆的确认：将挑出的阳性克隆放入含有HT液体培养基的96孔板中进行培养，每孔一个克隆，待细胞长满孔底后，取上清对阳性克隆进行确认。