[发明专利]一种甘蓝型油菜显性核不育恢复系的选育方法

权利要求书

1.一种甘蓝型油菜显性核不育恢复系的选育方法，包括以下步骤：

1)获得杂交F₁代

以基因型为MsMsrfrf的纯合两型系不育株为母本，以基因型为MsMsRfRf的显性核不育恢复系为父本，杂交，获得基因型为MsMsRfrf的F₁代种子；

2)小孢子培养

以F₁代植株为供体，取长度为3～4mm的花蕾，消毒清洗，加入B₅培养液研磨、离心，分离出游离小孢子，F₁代小孢子的基因型有Msrf和MsRf两种，在含秋水仙碱的NLN-13培养液中对小孢子进行暗培养，温度32℃～35℃，培养时间36h～48h，离心，去上清液，将沉淀的小孢子转移到新鲜的NLN-13培养液中，22℃～25℃继续暗培养，待肉眼可见颗粒状的胚状体后，在摇床上继续培养1-2周，得到子叶型胚状体；

所述秋水仙碱的浓度为50-70mg/L；

将子叶型胚状体转移到固体B₅培养基上，光照培养，诱导产生幼苗，扩繁拷贝幼苗，分别得到基因型为MsMsrfrf和MsMsRfRf的DH系植株，其中，基因型为MsMsrfrf的DH系不育，基因型为MsMsRfRf的DH系可育；

3)自交

将扩繁得到的DH系幼苗移栽到田间，在花期，筛选出雄性可育的DH株系，套袋自交，获得显性核不育恢复系种子。

2.根据权利要求1所述甘蓝型油菜显性核不育恢复系的选育方法，其特征在于，步骤1)中，所述的纯合两型系不育株为HY15A，作为父本的显性核不育恢复系为HF06。

3.根据权利要求1所述甘蓝型油菜显性核不育恢复系的选育方法，其特征在于，步骤3)中，对DH幼苗，无需等到花期，利用分子标记手段进行检测，筛选出基因型为MsMsRfRf的植株，获得显性核不育恢复系。