[发明专利]一种湖北海棠的组织培养方法

权利要求书

1.一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于，包含以下步骤：

S₁、外植体的消毒处理：选取一年生湖北海棠实生苗半木质化单芽茎段作为外植体，先用洗衣粉溶液浸泡30min，并用软毛刷刷洗表面脏污，然后流水冲洗2h后置于超净工作台中，用质量浓度为0.1％的HgCl₂溶液消毒7min，再用无菌水冲洗5次，冲洗完后切除茎段与药液接触的部分，在无菌滤纸上切成1～2cm的茎段；

S₂、初代培养：将步骤S₁处理后的1～2cm茎段接种到诱导培养基上进行初代培养，直至外植体腋芽萌发，长成2～3cm的植株，且培养室温度23～27℃，空气相对湿度50～60％，光照时间为12h·d^-1，光照强度1500lx，并定期喷洒酒精；

S₃、继代培养：将步骤S₂获得的植株接种到增殖培养基上进行继代培养，得到丛生芽，且培养室温度23～27℃，空气相对湿度50～60％，光照时间为12h·d^-1，光照强度1500lx；

S₄、生根培养：将步骤S₃过程获得的高度为2～3cm的丛生芽分切接种到生根培养基进行生根培养，且培养室温度23～27℃，空气相对湿度50～60％，光照时间为12h·d^-1，光照强度1500lx；

S₅、炼苗移栽：当根长到2～3cm时，将培养瓶敞口放置，炼苗3～5d得到试管苗，用镊子将试管苗从培养瓶中取出，洗去残留在根部的培养基，保证根部的完整性，再用质量浓度为0.1％的多菌灵对试管苗根部进行蘸根处理后移栽到基质中，放在温室中，并每天喷雾浇水。

2.根据权利要求1所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：在HgCl₂消毒和无菌水冲洗过程中，轻轻摇晃无菌瓶，使液体与外植体充分接触。

3.根据权利要求1所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤S₅中所述的基质由珍珠岩和蛭石混合组成，且珍珠岩和蛭石的质量比为1:1。

4.根据权利要求1或3所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤S₅中所述的基质在使用前两天用质量浓度为0.1％的高锰酸钾溶液对使用基质进行消毒。

5.根据权利要求1所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤S₂所述的诱导培养基为：MS+1.0mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA+30g·L^-1蔗糖+7.0g·L^-1琼脂+2.0g·L^-1PVP。

6.根据权利要求1所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤S₃所述的增殖培养基为：MS+0.5mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1IBA+30g·L^-1蔗糖+7.0g·L^-1琼脂+0.5g·L^-1PVP。

7.根据权利要求1所述的一种湖北海棠的组织培养方法，其特征在于：步骤S₄所述的生根培养基为：1/2MS+0.6mg·L^-1NAA+0.7mg·L^-1IBA+15g·L^-1蔗糖+7.0g·L^-1琼脂。