[发明专利]一种广泛适用于植物野外取样的保存液配方及其使用方法

说明书

本发明属于植物分子生物学领域，涉及一种广泛适用于植物野外取样的保存配方。其特征是由以下成分及其含量组成：A组分：50mM Tris‑HCl(PH＝8.0)，1mM Na₂EDTA，100mM葡萄糖，5％甘油，硼酸‑四硼酸钠缓冲液0.025mM，NaCl 1.6mM，CATB 0.5％(m/v)；B组分：琼脂粉。本发明能够保证外界不超过50℃，时间不超过72h的情况下可以完整保存任何植物样本RNA的完整性，且该溶液不会产生明显气味，对人体无害，在运输过程中也无易燃易爆等任何危害，可以携带上汽车火车等通用交通工具，也可以通过飞机等方式运输。回到实验室后，可通过专门的提取液将样品中的核酸提取出来，核酸质量可以达到建库标准。

技术领域：

本发明属于植物分子生物学领域，涉及一种广泛适用于植物野外取样的固体保存配方。

背景技术：

从分子水平研究植物变化是植物学科中十分重要的手段，在此基础上，芯片分析以及高通量测序等技术给我们带来十分庞大的数据信息。而目前人们遇到的麻烦之一是：许多植物样本位于远离实验室的地方，例如地处偏远的野生动植物保护区，这样取材的过程至少需要以下几个步骤：过于偏远的地方采用人工取样，在取样点将材料进行初级处理后，将其运输至交通较为便利的地方，通过交通工具进行样品转移直至实验室。而核酸，尤其是核糖核酸RNA，在离体0.2-0.5h左右的时间即降解，即便部分材料可以保存于乙醇等有机溶剂中，在运输过程中损失量同样较大且运输过程安全性较差。故对植物组织运输保存方法的研究仍有提高空间。

发明内容：

本发明的目的是在于提供一种植物野外取样的保存配方，通过此植物野外取样的保存液的使用，保护所取到的样品不受到伤害，在科研领域中，提供实验所需要的完整的RNA。

本发明的技术方案是：

1植物野外取样的保存液配方，其特征是由以下成分及其含量组成：A组分：50mMTris-HCl(PH＝8.0)， 1mM EDTA，葡萄糖100mM，甘油3％，硼酸-四硼酸钠缓冲液0.025mM，NaCl 1.6mM，CATB 0.5％(m/v)； B组分：琼脂粉15g/l。经无菌水溶解并适当加热(50-60度)至琼脂粉完全熔化，待液体冷却至40度后浸没植物标本使用。

2植物野外取样的保存液实验室处理方式：将样品周围琼脂去掉，将样品和残留琼脂一并放入50ml 离心管中，加入3mM异硫氰酸胍混合，按每ml保存液加入0.05gSiO₂，55度水浴10min，取出后用研磨棒研磨5min后，用振荡器剧烈震荡15min。12000rpm离心5min，将上清小心转移至另一离心管中，加入等体积氯仿进行震荡，后期操作与常规提取方法一致。

附图说明：

图1 经本产品保存及新鲜样品直接提取总RNA含量对比图

图2 RNA质量图

表1分光光度法检测结果

具体实施方式：

1.野外采样：将50ml保存液(A成分)中加入0.75g琼脂粉(B成分)，加热溶解后放置一旁冷却；将采集到的动植物样品放入50ml离心管中(如有必要可进行切割后放入离心管中)，待上述已加热的保存液冷却至40度以下时迅速倒入离心管中，冷却至固体后将管口用parafilm封口膜完全封闭。

2.运输过程中应注意防止高温(大于50度)或雨水等对管的污染。运输过程应不超过120h。

3.实验室预处理：将上述固体保存块从离心管中取出，去除多余的琼脂部分，将样品和残留琼脂一并放入新的离心管中，加入3mol/l异硫氰酸胍混合，按每ml保存液加入0.05gSiO₂，55度水浴10min，取出后用研磨棒研磨5min，之后用振荡器剧烈震荡15min。12000rpm离心5min，将上清小心转移至另一离心管中，加入等体积氯仿进行震荡。