[发明专利]一种嗜麦芽窄食单胞菌制备的生物碱类化合物及其制备方法

权利要求书

1.一种嗜麦芽窄食单胞菌制备的生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，生物碱类化合物是从保藏编号为：CCTCC NO：M 2014241的嗜麦芽窄食单胞菌Stentrophomonasmaltophilia QB-77的发酵培养物中制备分离得到，所述生物碱类化合物为生物碱fiscalin D化合物和生物碱fiscalin E化合物，其结构式如下：

2.根据权利要求1所述生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，步骤如下：

步骤一、菌株的活化：将嗜麦芽窄食单胞菌Stentrophomonas maltophilia QB-77取出活化培养；

步骤二、发酵培养：制备发酵培养基，将嗜麦芽窄食单胞菌Stentrophomonasmaltophilia QB-77置于发酵培养基中，在28℃，静置培养13d后，将菌体连同培养基捣碎，加入乙酸乙酯在28℃，130rpm下振荡萃取2次，合并2次萃取液，40℃下减压浓缩，得发酵产物；

步骤三、分离纯化：将步骤二的发酵产物用柱层析法分离，依次用不同体积比或者不同浓度的氯仿-丙酮、甲醇水、石油醚-丙酮和甲醇水洗脱后，TCL检测合并相同组分，得到生物碱类化合物。

3.根据权利要求2所述生物碱类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤三分离纯化的具体步骤为：a、将发酵产物用易挥发的溶剂溶解得到溶液，向溶液中加入硅胶粉混合均匀，待溶剂挥发后得到样品，将样品采用柱层析法分离，用氯仿-丙酮体积为30:1～1:2下依次梯度洗脱，根据TCL检测合并相同组分，共得8个组分，F1～F8；

b、将上述F4组分，用反相中压柱层析，甲醇水浓度为30～80％梯度洗脱，根据TCL检测合并相同组分，共得6个组分，F4-1～F4-6；

c、将上述F4-2组分，用正相硅胶柱层析，石油醚-丙酮体积比为4:1～2:1下依次梯度洗脱，得到生物碱fiscalin D化合物。

4.根据权利要求2所述生物碱类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤三分离纯化的具体步骤为：a、将发酵产物用易挥发的溶剂溶解得到溶液，向溶液中加入硅胶粉混合均匀，待溶剂挥发后得到样品，将样品采用柱层析法分离，用氯仿-丙酮体积为30:1～1:2下依次梯度洗脱，根据TCL检测合并相同组分，共得8个组分，F1～F8；

b、将上述F4组分，用反相中压柱层析，甲醇水浓度为30～80％梯度洗脱，根据TCL检测合并相同组分，共得6个组分，F4-1～F4-6；

c、将上述F4-3组分，用反相中压柱层析，甲醇水浓度为20～50％下依次梯度洗脱，得到生物碱fiscalin E化合物。

5.根据权利要求2所述生物碱类化合物的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基由葡萄糖、麦芽抽提物、酵母粉、碳酸钙、微量元素预混液、加入腐殖酸浸泡24h后的双蒸水和琼脂粉配制而成。

6.根据权利要求5所述生物碱类化合物的制备方法，其特征在于：所述微量元素预混液为ZnSO₄·7H₂O 2g、FeSO₄·7H₂O 2g、MnCl₂·4H₂O 2g、CuSO₄·5H₂O 2g、Na₂B₄O₄·10H₂O 2g和(NH₄)₆MO₇·4H₂O 2g，用双蒸水定容至1L配制而成。