[发明专利]转基因细胞测活方法测定IL-5或IL-5Rα抗体活性

说明书

本发明涉及转基因细胞测活方法测定IL‑5或IL‑5Rα抗体活性。所述方法包括构建得到稳定表达STAT5RE报告基因的效应细胞TF‑1‑IL‑5/STAT5RE‑luc，继而用IL‑5刺激激活报告基因表达，用IL‑5或IL‑5Rα抗体药物阻断IL‑5信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。本发明建立了快速、准确、定量的转基因细胞测活方法用以测定IL‑5或IL‑5Rα抗体活性，实验周期短，避免了长时间孵育所带来的细胞污染等实践难题，并且操作简便，具有很好的应用前景和应用价值。

技术领域

本发明涉及生物药物活性检测领域，针对IL-5或IL-5Rα单克隆抗体药物生物学活性测定建立了更加快速、准确的转基因细胞测活方法。

背景技术

IL-5是一种细胞因子，能够调节嗜酸性粒细胞(白细胞)的生长、活化、存活，并能够为嗜酸性粒细胞从骨髓迁移至肺部及其他器官提供重要的信号。美泊利单抗(Mepolizumab，商品名Nucala)是一种IL-5拮抗剂，于2015年11月4日获FDA批准上市，用于12岁及以上年龄的患者，并与其它哮喘药物一起用于哮喘的维持性治疗。美泊利单抗与IL-5结合，阻断其与IL-5R的结合，使IL-5信号通路不能被激活，从而减少血液和组织中嗜酸细胞性细胞的增殖和分化，可以有效减少严重哮喘病人的恶化并改善肺功能。

目前美泊利单抗的生物学活性测定方法是细胞增殖抑制的方法，该方法利用对IL-5有生长依赖性的人红白血病细胞系TF-1-IL-5作为靶细胞，加入Mepolizumab单抗和IL-5，孵育43-45小时后，通过测定细胞的数量来反应美泊利单抗的生物学活性。该方法实验周期长(美泊利单抗作用时间43-45小时，加入底物后孵育时间6小时)，变异较大。

单克隆抗体已经成为全球医药市场的重要组成部分，并贡献了主要的市场扩容力量，2016年全球畅销药排名前十的重磅药中以阿达木单抗为首的单克隆抗体药物占据半壁江山。面对抗体类药物的快速发展，迫切需要建立相应的抗体药物质量评价技术体系，而活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。目前活性检测方法多采用基于细胞的生物活性测定方法，包括细胞增殖抑制法、细胞毒性法、补体依赖的细胞毒法、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性法和细胞ELISA法等。

本发明建立了快速、准确、定量的转基因细胞测活方法用以测定IL-5或IL-5Rα抗体活性，实验周期短，避免了长时间孵育所带来的细胞污染等实践难题，并且操作简便，具有很好的应用前景和应用价值。

发明内容

本发明提供了一种快速测定IL-5/IL-5Rα抗体药物生物学活性的方法，所述方法包括构建得到稳定表达STAT5反应元件(Response element，RE)报告基因的效应细胞，用IL-5刺激激活报告基因表达，并用IL-5/IL-5Rα抗体药物阻断IL-5信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。

本发明的目的在于提供一种快速测定IL-5/IL-5Rα抗体药物生物学活性的方法，所述方法包括：

(1)构建得到稳定表达STAT5RE报告基因的效应细胞；

(2)将IL-5/IL-5Rα抗体药物样品及参比品等比例稀释，将稀释后的抗体分别加入细胞板，然后加入IL-5混合；

(3)将(1)所述细胞加入(2)所述细胞板中，在37℃培养箱中进行孵育；

(4)加入荧光素酶底物，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。