[发明专利]RT-qPCR检测猕猴SLC22A11/OAT4基因转录水平的方法

说明书

本发明提供一种RT‑qPCR检测猕猴SLC22A11/OAT4基因转录水平的方法，以样品总RNA反转录成cDNA为模板，利用PCR引物组合进行qPCR扩增，得到猕猴SLC22A11/OAT4基因片段的扩增产物，以零点作对照，均一化后的基因倍数表达，获得相对表达值，根据所得相对表达值即可计算出不同生理状况下猕猴SLC22A11/OAT4基因mRNA的相对表达值，并根据相对表达值的大小定量检测猕猴SLC22A11/OAT4基因转录水平变化，为研究猕猴SLC22A11/OAT4功能以及相关药物对其影响提供有效途径。本发明适用于实时定量PCR检测，操作简单，可重复性高，检测成本低、灵敏性高、特异性强。

技术领域

本发明涉及一种检测方法，尤其是涉及一种用实时荧光定量RT-qPCR法检测猕猴有机阴离子转运蛋白家族成员SLC22A11/OAT4基因转录水平的方法，属于分子生物技术领域。

背景技术

近年来，全基因组关联分析(Genome-wide association studies，GWAS)已检出多个导致高尿酸血症和痛风的易感位点及相关候选基因。其中SLC2A9、SLC22A11 和SLC22A12基因功能缺失性突变可引起遗传性低尿酸血症，而过表达则会加强尿酸的重吸收。ABCG2、SLC17A1 和SLC17A3 基因功能缺陷型变异会降低肾脏和肠道对尿酸的排泄量。有机阴离子转运蛋白家族成员SLC22A11/OAT4在近曲小管细胞中表达并锚定于顶膜，OAT4被证明为不对称低亲和转运蛋白，利用有机阴离子与二羧酸盐交换的形式对尿酸重吸收。研究显示SLC22A11/OAT4作用于机体肾脏近曲小管对尿酸的重吸收。

近年来，由于饮食结构和生活习惯的改变，高尿酸血症（hyperuricemia，HUA）的患病率逐年增高，流行病学研究资料表明高尿酸血症和原发性痛风的发病呈上升趋势，在中国，已经有1.2亿的HUA人群，大约占总人口的10%，中老年及绝经后的妇女为高发人群，近年来发病年龄也呈年轻化的趋势。高尿酸血症与肥胖、高血压、高脂血症、冠状动脉粥样硬化性心脏病、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为识别代谢综合征的早期标志，血液尿酸水平受肝脏中尿酸的产生量及肾脏和肠的排泄与重吸收平衡状态的影响，所以对体内尿酸稳态的控制是治疗高尿酸血症和痛风的关键。无论是药物的筛选, 还是致病机制的研究，都需要科学、合理的动物模型来开展高尿酸血症致病机理的研究及开发相关降血尿酸的药物。

猕猴(Macaca Malatta)，又名恒河猴（rhesus monkey），由于在形态学、生理生化代谢等方面与人类非常相似，是较为理想的实验动物。其尿酸代谢途径与人类相似，是研究该病的最佳实验动物，研究成果具有极高的转化能力。为了利用人类的近亲—猕猴来开展高尿酸血症致病机理的研究及开发相关降血尿酸的药物，需要建立一种猕猴有机阴离子转运蛋白家族成员SLC22A11/OAT4mRNA 表达的相对定量方法，以研究药物作用猕猴体内SLC22A11/OAT4mRNA基因的转录水平变化，进而为研究SLC22A11/OAT4功能及其对机体血清尿酸的影响因素打下基础。因此，建立qPCR检测猕猴有机阴离子转运蛋白家族成员SLC22A11/OAT4mRNA基因转录水平的方法，对于开展利用动物模型进行的HUA发病机制研究及新药筛选具有重要意义。