[发明专利]一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法

权利要求书

1.一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于，它包含如下步骤：

S1：包装细胞的培养；

S2：包装细胞的灭活；

S3：灭活的包装细胞与T淋巴细胞活化混合物的共孵育；

S4：利用挤压技术(Extrusion)制备囊泡悬液；

S5：利用密度梯度离心法纯化包裹T淋巴细胞活化混合物的囊泡。

2.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S1中所述的包装细胞可以为除T淋巴细胞之外的原代细胞或永生化的细胞株(系)，且不限于未经基因修饰的细胞，培养在37℃、含5％的二氧化碳和95％空气的饱和湿度温箱中进行。

3.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S2中所述的细胞灭活方法可以为一定剂量的伽马射线照射(例如20-500GR)，也可以为某些化疗药物的处理(例如15ug/ml的丝裂霉素处理4个小时) 。

4.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S3中所述的T淋巴细胞活化混合物的成分包括但不限于：抗CD3活化抗体(克隆号OKT3)，抗CD28活化抗体，白细胞介素2，白细胞介素7，白细胞介素15，白细胞介素21等。

5.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S4中所述挤压技术(Extrusion)包括利用手动以及自动的挤压装置(例如脂质体挤出仪)，依次通过不同孔径(例如：10um、5um、1um)的微孔滤膜(例如聚碳酸酯滤膜) 。

6.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S5中所述的密度梯度离心是以碘克沙醇、蔗糖、氯化铯、氯化铷或溴化铯为密度材料，所述密度梯度为10％、20％、30％、40％、50％或更多不同浓度的所述梯度材料溶液，离心的速度为10000-200000g，离心的时间为1-24小时，离心的温度为0-37摄氏度。

7.根据权利要求1所述的一种用于扩增T淋巴细胞的纳米级膜性囊泡的制备方法，其特征在于：步骤S5中所述获得的囊泡包裹有T淋巴细胞活性混合物，可以用于体内、体外T淋巴细胞的活化和增值。