[发明专利]一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物保护生物学和生物技术领域，特别涉及一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法。

背景技术

小花万代兰（Vanda coerulescens Griff.）是兰科万代兰属植物，分布于印度东北部、缅甸、泰国，以及中国云南的西镇康、澜沧、墨江、思茅、景洪、勐海、勐腊、元江、元阳等县；生于海拔700-1600米，附生于疏林中树干上。为附生兰，茎粗壮，长8-30厘米，叶多枚，二列，先端有不规则缺刻；总状花序1-2个，长达36厘米，具多花，花色白色带淡蓝色，花期3-5月，国家二级保护植物，具有重要的育种、观赏、科研、保护等价值。但由于人们过度的采伐以及其生长环境发生变化，野外的小花万代兰种源稀缺，因而需要对其进行人工繁殖，一方面除了满足市场以及育种、科研的需求外，另一方面可将人工繁殖的种苗回归原产地放养，令其能自然繁殖，扩大其种群数量，极好地保护该物种的多样性。

目前世界上还没有小花万代种苗繁殖专利和文献报道。因此有必要设计一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供的技术方案是：一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法，包括下列步骤：

第一步：将小花万代兰蒴果用酒精浸泡，然后用升汞溶液消毒，接下来用无菌水冲洗，再于无菌条件下用无菌滤纸吸干所述蒴果表面的水分；接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子洗脱至一容纳有无菌水的容器内，制成种子悬浮液，然后用无菌水将所述种子悬浮液调整成浓度20~30粒种子/毫升的接种用种子悬浮液；

第二步：无菌条件下，将所述接种用种子悬浮液移至一容纳有一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每个所述兰花培养瓶中的种子数量为40~60粒；每升所述一次成苗培养基含有1~2g的花宝1号、1～2g的花宝2号、0.5～2g的蛋白胨、40~80g的土豆泥、50~100g的香蕉泥、10~20g的苹果泥、500~1000mg的活性碳、80~120mg的肌醇、1.5~2.5mg的甘氨酸、0.05~0.2mg的盐酸硫胺素、0.4~0.8mg的盐酸吡哆醇、0.4~0.8mg的烟酸、0.05~0.1mg的6-苄基嘌呤、0.2~2 mg的萘乙酸、15～30g的蔗糖、6～7g的琼脂；所述一次成苗培养基的pH 值为5.4-5.6；

第三步：将所述培养瓶在温度为23~27℃，光照强度为100～1000 Lux的条件下培养60~90天，使种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片得到小苗；

第四步：将所述小苗在24~28℃，光照强度为1000～3000 Lux的条件下培养，获得高度为3~5cm、叶片数量为3～5片、根须的数量为3～5条、根的长度为1～3厘米的大苗；

第五步：将所述大苗在24~28℃，光照强度为3000～5000 Lux的条件下培养，获得高度为5~7cm、叶片数量为4片以上、根须的数量为5条以上、根的直径为3毫米以上的生根苗；

第六步：从培养瓶中取出所述生根苗，洗净附着在所述生根苗上的培养基后，用高锰酸钾溶液浸泡，然后将生根苗晾干至生根苗的根变白后栽培在基质上。

优选的技术方案为：将小花万代兰蒴果用体积分数为70%的酒精浸泡20~40秒，然后用质量分数为0.1~0.3%的升汞溶液消毒15~20分钟，接下来用无菌水冲洗4~5次，再于无菌条件下用无菌滤纸吸干所述蒴果表面的水分；接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子洗脱至一容纳有200毫升无菌水的容器内，制成种子悬浮液。

优选的技术方案为：在第六步中，用质量分数为0.1~0.3%的高锰酸钾溶液浸泡4~6分钟。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有的优点是：

本发明采用成熟的蒴果进行无菌播种、一次培养成苗，具有繁殖速度快、种苗品质优良、生长成本低等特点，只需要简单的组织培养设备就可以完成。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。

实施例1：一种小花万代兰种苗无菌播种繁殖方法

（1）材料：开花时选取生长健壮的小花万代兰进行人工授粉，授粉后150天选择种子基本成熟而未开裂的蒴果为外植体用于无菌播种。