[发明专利]一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

所述胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体的原料成分为：胶乳微球、Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为9％-11％；

所述R1试剂的配制：

①按照试剂R1的组分含量，配制MOPSO缓冲液，并用稀盐酸或氢氧化钠调节pH至6.5，作为R1缓冲液；

②按照试剂R1的组分含量，将NaCl、NaN₃、阿拉伯胶、Tween-80、PEG-2000溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；

所述胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体的制备：

a.取20g/L粒径为80nm和40g/L粒径为120nm的胶乳微球于100mM MES缓冲液中，加入50g/L的EDAC溶液，混匀后于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清；再加入50g/L的NHS溶液恢复至原体积后，混匀于37℃环境中孵育混匀1h，离心去上清，得混合微球乳液；

b.在混合微球乳液中加入上述组分含量的聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，在37℃温度下反应2h，共聚80nm和120nm粒径的胶乳；离心沉淀，将剩余物质分散于MES缓冲液中，反复3次，最后于MES缓冲液中恢复至原体积，再加入Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体，于37℃下反应3.5h，离心，将沉淀物分散于原体积的PBS缓冲液中，反复3次，最后将沉淀物分散于原体积的NHS缓冲液中，加入BSA 30g/L；

c.4℃封存48h，得最终所需的胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

所述胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体的原料成分为：胶乳微球、Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10％。

3.根据权利要求1所述的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：

试剂R1：

试剂R2：

所述胶乳包被的Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体的原料成分为：胶乳微球、Ⅳ型胶原蛋白多克隆抗体和聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物，其中，聚乙烯对氯甲基苯乙烯共聚物在整体试剂R2中的含量为10.5％。

4.根据权利要求1-3任一项所述的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的MOPSO缓冲液的pH为6.5。

5.根据权利要求1-3任一项所述的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2的MOPSO缓冲液的pH为6.5。

6.一种以非疾病诊断目的使用如权利要求1-3任一项所述的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将待测样品与试剂R1混合，37℃孵育5min；

(2)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A1；

(3)再与试剂R2混合，37℃反应5min；

(4)用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度A2；

(5)根据吸光度变化值计算出样本中Ⅳ型胶原蛋白的浓度。

7.根据权利要求6所述的以非疾病诊断目的的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)的试剂R1和步骤(3)的试剂R2的体积比为4:1。

8.根据权利要求6所述的以非疾病诊断目的的Ⅳ型胶原蛋白检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)的待测样品与试剂R1和试剂R2构成的试剂液之间的体积比为1:50。