[发明专利]鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法在审
| 申请号： | 201710915815.6 | 申请日： | 2017-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN107828766A | 公开（公告）日： | 2018-03-23 |
| 发明（设计）人： | 谢少康 | 申请（专利权）人： | 金华市川璞农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 321000 浙江省金华市婺城区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鲶鱼 内脏 蛋白酶 制备 方法 | ||
1.鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，包括浸提、盐析、透析、纯化，其特征在于：所述浸提步骤为匀浆机均质鲶鱼内脏后,加入缓冲液浸提、离心，所得上清液即为鲶鱼内脏粗提液，鲶鱼内脏与缓冲溶液的重量体积比为1~1.5g:0.8ml，浸提时间为3~5h。
2.根据权利要求1所述的一种鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，其特征在于：所述浸提步骤中缓冲溶液为含有活性多肽的磷酸盐缓冲液，缓冲溶液的pH为6.6~7，缓冲液中活性多肽浓度为0.2~0.3%。
3.根据权利要求2所述的一种鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，其特征在于：所述活性多肽的氨基酸序列为SCASRYGRRCRAGRCKGYACRCRSFRCRAGRSRIGRCKCFRC。
4. 根据权利要求1所述的一种鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，其特征在于：所述盐析步骤为在鲶鱼内脏粗提液中加入饱和度硫酸铵沉淀后，鲶鱼内脏粗提液与饱和度硫酸铵的重量体积比为1g:1.3~1.6ml，在4~7℃、9000~10000 r/min下离心12~15min。
5.根据权利要求1所述的一种鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，其特征在于：所述透析步骤为将沉淀物溶解在磷酸盐缓冲液中，在4~7℃的蒸馏水中透析30~32h，每6~8小时换1次蒸馏水。
6.根据权利要求1所述的一种鲶鱼鱼内脏蛋白酶的制备方法，其特征在于：所述纯化步骤为将透析液采用羟基磷灰石吸附层析法制备鲶鱼内脏纯蛋白酶，层析柱规格为直径为2~5cm，长52~60cm，流动相选用pH为6.8~7、浓度为0.01~0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，流速为0.3~0.7ml/min，将得到的用洗脱液洗脱后并冷冻干燥，即得鲶鱼内脏纯蛋白酶。
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