[发明专利]一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统及应用和方法有效

专利信息
申请号: 201710919695.7 申请日: 2017-09-30
公开(公告)号: CN107619836B 公开(公告)日: 2020-10-09
发明(设计)人: 夏庆友;沈关望;林英 申请(专利权)人: 西南大学
主分类号: C12N15/85 分类号: C12N15/85;C12N15/54;A01K67/04
代理公司: 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 代理人: 赵荣之
地址: 400715*** 国省代码: 重庆;50
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摘要:
搜索关键词: 一种 降低 吐丝 活性 20 浓度 改变 营养 分配 比例 增加 蚕茧 产量 系统 应用 方法
【权利要求书】:

1.一种降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的系统,其特征在于:所述系统包含GAL4/UAS双元系统,所述系统中GAL4基因由BmLP3启动表达,UAS调控EGT表达,所述BmLP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述EGT基因的核酸序列如SEQ IDNO.2所示,所述GAL4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述UAS的核苷酸序列如SEQID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的系统,其特征在于:所述GAL4/UAS双元系统分别位于两个载体上,分别记为重组转基因载体A和重组转基因载体B,所述重组转基因载体A含有由BmLP3启动GAL4基因表达的表达框;所述重组转基因载体B含有由UAS调控EGT表达的表达框。

3.根据权利要求2所述的系统,其特征在于:所述重组转基因载体A由以下方法制备:以家蚕品种dazao基因组为模板,扩增LP3启动子序列,并连入pSL1180质粒的Sal I /BamH I酶切位点处,得pSL1180[Lp3-SV40]载体,将合成的GAL4核酸序列连入pSL1180[Lp3-SV40]载体的BamH I/Not I 酶切位点处,获得pSL1180[Lp3-GAL4-SV40]中间载体,进一步将pSL1180[Lp3-GAL4-SV40]中间载体质粒和pBac[3xP3-EGFP]质粒用AscⅠ单酶切,分别回收含有BmLP3启动GAL4基因表达的表达框和载体骨架,连接获得重组转基因载体A,命名为pBac[3xP3-EGFP,BmLP3-GAL4-SV40]。

4.根据权利要求2所述的系统,其特征在于:所述重组转基因载体B由以下方法制备:扩增EGT基因并连入pSL1180质粒的EcoRI/Xho I酶切位点处,获得中间载体pSL1180[EGT],然后将UAS片段再连入中间载体pSL1180[EGT]的Asc Ⅰ/ EcoR I酶切位点处,获得重组载体pSL1180[UAS-EGT],再将重组载体pSL1180[UAS-EGT]和pBac[3xP3- DsRed]质粒分别用AscⅠ单酶切,分别回收含有UAS调控EGT表达的表达框和载体骨架,连接获得重组转基因载体B,命名为pBac[3xP3-DsRed,UAS-EGT]。

5.权利要求1~4任一项所述的系统在提高家蚕蚕茧产量中的应用。

6.利用权利要求1~4任一项所述的系统制备降低吐丝期活性20E浓度改变丝蛹营养分配比例增加蚕茧产量的方法,其特征在于,包括如下步骤:将含有BmLP3启动GAL4基因表达的重组转基因载体与辅助质粒混合后注射已解除滞育的蚕卵,孵化后筛选阳性转基因家蚕,制成转基因家蚕GAL4系统;然后将含有UAS调控EGT表达的重组转基因载体与辅助质粒混合后注射已解除滞育的蚕卵,孵化后筛选阳性转基因家蚕,制成转基因家蚕UAS-EGT系统;再将转基因家蚕GAL4系统和转基因家蚕UAS-EGT系统杂交,筛选同时含有GAL4和EGT基因的蚕卵,即获得通过外源蛋白降低家蚕吐丝期蜕皮激素含量来延长家蚕吐丝期增加蚕茧产量的转基因家蚕素材。

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