[发明专利]一种早期广泛检测支原体的PCR方法

说明书

本发明公开了一种早期广泛检测支原体的PCR方法。首先设计得到一组可早期广泛检测支原体的引物组，并进一步构建了PCR检测方法和检测试剂盒。所述引物组包括正向引物F和反向引物R；序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明的引物组和PCR检测方法对支原体的检测数量和种类广泛，可以覆盖115种支原体，且灵敏度高，能够实现支原体早期检测鉴定，而且方法简单、快速、高效、经济，对于实际工作中早期实现支原体的检测和鉴定具有重要的意义和推广应用价值。

技术领域

本发明属于病原检测技术领域。更具体地，涉及一种早期广泛检测支原体的PCR方法。

背景技术

支原体是目前发现的最小的原核生物。直径为0.2-0.3μm，无细胞壁，具有很强的变形能力。支原体种类繁多、分布广泛，给基础研究和人类健康造成了极大的影响。在基础研究和人体健康中，往往是多种支原体造成的污染和危害。因此在污染和危害的早期实现支原体的检测和鉴定显得尤其重要和关键。

PCR是支原体检测的一种常用方法，它具有快速，灵敏和特异的优点。但是，目前用于支原体检测的PCR方法中，检测支原体的数量和种类有限，且灵敏性较差，特别在于支原体的污染和危害的早期，往往难检测出来。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有支原体检测方法存在的检测数量和种类有限、灵敏性差、无法实现早期检测鉴定等缺陷和不足，通过优化样本处理流程和重新设计新的支原体检测的PCR引物，可以用于快速早期多种支原体的检测，提供了一种能够实现早期检测鉴定，检测数量和种类广泛，且快速、高效的检测支原体的方法。

本发明的目的是提供一组可早期广泛检测支原体的引物组。

本发明另一目的是提供一种早期广泛检测支原体的PCR方法。

本发明再一目的是提供一种早期广泛检测支原体的试剂盒。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一组可早期广泛检测支原体的引物组，包括正向引物F和反向引物R；序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

该引物组检测支原体数量和种类广泛，且灵敏度高，可以快速用于早期多种支原体的检测。

因此，所述引物组在检测支原体方面的应用或在制备支原体检测试剂盒方面的应用，均应在本发明的保护范围之内。

一种早期广泛检测支原体的PCR方法，是以样品DNA为模板，利用权利要求1所述引物组进行PCR扩增，根据扩增结果判断样品中是否含有支原体。

优选地，结果判断的标准是：将扩增产物进行凝胶电泳，如果出现特异性条带，则判定样品中含有支原体。

优选地，所述PCR扩增的反应体系为：正向引物F(10nM)1μL、反向引物R(10nM)1μL、10×PCR buffer 2.5μL、dNTP(2.5mM each)4μL、Ex-Taq 0.25μL、模板2μL、水补足25μL。

优选地，所述PCR扩增的反应程序为：94℃3分钟；94℃30秒，55℃～65℃30秒，72℃30秒，30个循环；72℃5分钟；4℃5分钟。

更优选地，所述PCR扩增的反应程序为：94℃3分钟；94℃30秒，57℃30秒，72℃30秒，30个循环；72℃5分钟；4℃5分钟。

一种早期广泛检测支原体的试剂盒，所述试剂盒包括上述引物组。

优选地，所述试剂盒所使用的检测方法如上述PCR方法。

另外，所述PCR方法或所述试剂盒在检测支原体方面的应用，也都应在本发明的保护范围之内。

本发明具有以下有益效果：