[发明专利]一株产石杉碱甲和石杉碱乙的路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株及用途

说明书

本发明提供了一株产石杉碱甲和石杉碱乙的路德维希肠杆菌SXZ‑N5菌株，该菌株可产石杉碱甲和石杉碱乙。该菌株被命名为SXZ‑N5，属一种路德维希肠杆菌，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学；邮编430072，保藏日期为2017年9月14日，保藏编号为：CCTCC NO：M2017511；该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。上述路德维希肠杆菌SXZ‑N5菌株能够用于发酵制备石杉碱甲和石杉碱乙。微生物发酵条件为：培养基配方：酵母粉4.0g，蛋白胨8.0g/L，氯化钠7.0g/L，葡萄糖9.0g/L，pH 6.0；培养条件：28℃，200r/min，发酵培养10天。

技术领域

本发明涉及一种路德维希肠杆菌菌株，该菌株可产石杉碱甲和石杉碱乙，属于微生物技术领域。

背景技术

目前植物内生菌的研究逐渐受到重视，不同植物的各种内生菌相继被发现。内生菌种类的多样性也赋予了其代谢产物的多样性，这也预示着利用微生物代谢发掘生物、化学、医药等新资源具有巨大的潜力。大量的研究表明，植物内生菌可产生与宿主植物相同或相似的活性物质及前体，这一发现直接推动了植物内生菌尤其是药用植物内生菌研究的广泛展开。随着人们对药用植物内生菌的逐步研究，利用能够代谢产生相应活性成分的内生菌来生产新型、高效、低成本的活性药物，解决珍稀中药植物资源紧缺的现状，必将成为将来药用植物内生菌研究的重点。

蛇足石杉中的药用活性成分石杉碱甲(Huperzine A，HupA)和石杉碱乙(Huperzine B，HupB)是一种低毒、高效抑制乙酰胆碱酯酶(AChE)的药物，其中石杉碱甲对治疗“阿尔茨海默症(老年痴呆症)”(Alzaheimer disease，AD)有很好的疗效。然而，由于蛇足石杉植物资源匮乏且生长缓慢、石杉碱甲含量很低等原因，仅依靠从蛇足石杉提取石杉碱甲无法满足市场需求然而化学合成的石杉碱甲的活性远低于天然石杉碱甲，且得到高光学活性的石杉碱甲成本较高。目前本领域中有一些利用蛇足石杉内生菌进行微生物发酵从而生产石杉碱甲的相关报道，但是这些菌株的种类以及产量还是无法满足市场对于石杉碱甲的需求。

发明内容

本发明解决了背景技术中的问题，提供了一株产石杉碱甲和石杉碱乙的路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株，该菌株可产石杉碱甲和石杉碱乙。

本发明人筛选到一株新型菌株，该菌株被命名为SXZ-N5，属一种路德维希肠杆菌(Enterobacter ludwigii)，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学；邮编430072，保藏日期为2017年9月14日，保藏编号为：CCTCC NO：M2017511；该菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

上述路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株能够用于发酵制备石杉碱甲和石杉碱乙。微生物发酵条件为：培养基配方：酵母粉4.0g，蛋白胨8.0g/L，氯化钠7.0g/L，葡萄糖9.0g/L，pH6.0；培养条件：28℃，200r/min，发酵培养10天。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：本发明所提供的路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株能够代谢产生石杉碱甲和石杉碱乙。本发明提供的菌株可以在短期内进行大规模发酵培养，且发酵成本较低，又不受时域、季节等条件限制，因此能够通过微生物发酵的途径解决石杉碱甲成本较高、市场需求缺口大的现状。同时本发明中还提供了优化后的微生物发酵条件以及培养基的配方，石杉碱甲和石杉碱乙的产量较高。

附图说明

图1为路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株第一次HPLC检测图；

图2为路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株第二次HPLC检测图；

图3为路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株的石杉碱甲的MS检测图；

图4为路德维希肠杆菌SXZ-N5菌株的石杉碱乙的MS检测图。

具体实施方式