[发明专利]50到60度酒酒精度简便快速测定方法

说明书

酒精度是酒类产品的必测指标，目前缺乏兼具准确可靠、简便快速和经济实用的酒精度测定方法。本发明利用DNA片段在含乙醇体系中会发生解链导致其在260nm波长下吸光度发生改变，从而建立了一种新的酒精度测定方法。本发明针对50到60度酒筛选到合适的短双链DNA片段混合体系如SEQ ID NO：1‑2所示，建立了其吸光度x和酒样酒精度y的标准曲线方程为y=8.8697x+48.577（50≤y≤60）。本发明的酒精度测定方法适用于50到60度酒的测定，具有良好的准确性和可靠性，无需蒸馏比较安全，操作简便迅速，所需酒样量很少，且价格低廉，适合于酒厂50到60度酒酒精度测定实践。

技术领域

本发明涉及乙醇检测方法，特别涉及一种50到60度酒的乙醇含量即酒精度的简便快速测定方法。

背景技术

乙醇是酒的主要成分，其含量是酒品质的重要指标之一，国标中称之为酒精度，通常它是指在 20 ℃下，每 100 ml 酒液中含有的乙醇毫升数。酒精度是酒类产品的必测指标，目前测定方法有很多，常见的包括酒精度计法、密度瓶法、气相色谱法和近红外光谱法等。气相色谱法和近红外光谱法这两种是基于现代分析技术的方法，具有检测灵敏度高、结果精确、可以高通量测定等优点，但是也存在设备昂贵、操作复杂和检测成本高等不足，因此不适合酒厂检测实际。酒厂中最常用的是酒精度计法和密度瓶法，然而这两种方法检测前均需对饮料酒预先蒸馏，除去杂质后，再对酒精水溶液进行测定。整个检测过程耗时长、步骤多、稳定性差，不能满足快速检测发展的需求。

综上可知，目前亟需建立准确可靠、简便快速且经济实用的酒精度测定方法，针对50到60度酒本发明提供了基于特定超短DNA片段（即寡聚脱氧核苷酸链）在不同酒精度酒样中变性程度不同导致260nm波长下吸光度有所差异，而建立了一种新的酒精度测定方法即满足此需求。DNA双链是靠碱基之间的氢键和堆积力维持的，然而在一些外在因素如高温、极端pH、有机试剂如尿素、甲酰胺、甲醇和乙醇存在时，这些维持力会遭到破坏，从而使得DNA双链解链变成单链，导致其在260nm下的吸光度大幅增加（又称增色效应）。利用这一特性，构建合适的DNA体系，将酒样加入其中处理，利用该DNA体系吸光度同酒样中酒精度之间的关联，从而实现酒精度的测定。

发明内容

本发明的目的在于提供50到60度酒酒精度的简便快速测定方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为，50到60度酒酒精度简便快速测定方法的主要步骤如下：

（1）移取400ul室温待测50到60度酒酒样到空的酶标板中，加入50ul初始变性剂和50ul短双链DNA片段混合体系并充分混匀后静置5min，同时设置对照孔为400ul待测酒样加50ul初始变性剂加50ul蒸馏水，待测酒样和对照均取平行测三次，样本处理好后将酶标板置于酶标仪中。

（2）设定好酶标仪程序在260nm波长下测定样品孔和对照孔中的吸光度，则样品的平均吸光度减去对照的平均吸光度即为样品中短双链DNA片段混合体系的实际吸光度。将样品中DNA体系的实际吸光度x代入关系式y=8.8697x+48.577（50≤y≤60）中换算出酒样的酒精度y。

其中，步骤（1）中所述的50到60度酒是指酒精度大于等于1且小于等于20的酒水类产品；所述酒样温度为正常室温即可，优选地，控制在30.0±5.0℃之间；所述的初始变性剂是12%质量体积分数的尿素和15%体积体积分数的甲酰胺混合水溶液，即每100ml混合水溶液中含有12g尿素和15ml甲酰胺；所述的短双链DNA片段混合体系包括了2条短双链DNA片段1和2，其序列分别如SEQ ID NO：1-2所示，各条短双链DNA片段浓度均为10μmol/l。