[发明专利]一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途

说明书

技术领域

本发明属于药物领域，涉及已知化合物的新用途，具体涉及一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途。

背景技术

盐酸沙格雷酯片1993年在日本首次上市，商品名为Anplag，是一种5-HT2受体阻滞剂，能够抑制血小板凝聚、抑制血管收缩，具有抗血栓作用以及改善微循环。其适应症为改善慢性动脉闭塞症引起的溃疡、疼痛以及冷感等缺血性诸症状。

盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ是盐酸沙格雷酯的一种光降解杂质，其化学结构式如下：

现有技术中，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ主要用于盐酸沙格雷酯原料及制剂的质量控制，没有关于其药理活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于增强CIK细胞活性的用途。

本发明通过下面的技术方案得以实现：

盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途。

一种用于增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物制剂，含有上述盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ。

优选地，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂制成药学上可以接受的剂型。

优选地，所述载体或赋形剂为PVP K-90。

PVP K-90在增强盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ热稳定性方面的应用。

本发明的优点：

本发明提供了盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ用于制备增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性的药物的用途，盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ可以用于增强CIK细胞的增殖能力和对肿瘤细胞的杀伤能力，这突破了现有技术对盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的认知水平；本发明还提供了一种盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的药物制剂，该制剂中至少含有PVP K-90，PVP K-90可以用于提高盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ的热稳定性，抑制其在高温条件下的降解水平。

附图说明

图1为不同浓度盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞增殖的影响(OD450值比较)；

图2为盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ对CIK细胞体内外杀瘤活性的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步介绍本发明的技术方案。

实施例1盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ增强CIK细胞增殖活性和杀瘤活性

一、实验材料

DMEM、RPMI-1640和GT-T551培养液，以及胎牛血清均为美国Gibco公司产品。青霉素-链霉素溶液产自碧云天。淋巴细胞分离自健康志愿者外周血。SMMC-7721肝癌细胞系于上海中科院购买，本实验室长期保存。盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ自制，HPLC归一化纯度大于98％。

二、实验方法

1、CIK细胞分离及原代培养

采集健康志愿者血液20mL，平衡温度至室温。取50mL离心管若干，将血样转移至离心管，用生理盐水稀释至30mL，充分吹打均匀。将稀释后的血样缓缓加入另一管装有15mL淋巴细胞分离液的上方，形成上下两相。22℃，390g离心30min。离心后血浆层与分离液之间有白膜层可见，分别收集上层血浆和中间白膜层至新的离心管。于收集白膜层的离心管中加入RPMI-1640至45mL，混匀，22℃，1000g离心10min。重复上一步骤两次，离心速度分别改为400g和201g，最后一次离心之前取20μL混匀的细胞悬液进行台盼蓝染色计数。离心后重悬细胞，按细胞数5×10⁶个/mL加含有500μg/L CD3mAB，1000U/mL IL-2和10％FBS的GT-T551培养基诱导培养成CIK细胞。

2、肿瘤细胞培养

在37℃，5％CO₂及90％相对湿度的细胞培养箱中用DMEM完全培养液(含10％胎牛血清和100mg/L青-链霉素溶液)培养SMMC-7721细胞。

3、CCK-8检测细胞增殖活力

将培养7d的CIK细胞数调整至3×10⁵个/mL，于96孔平底细胞培养板每孔加入细胞悬液50μL，设干预组和对照组，对照组为生理盐水组，干预组分为低、中、高浓度组，分别加入盐酸沙格雷酯杂质Ⅲ终浓度为5、10、20μM的培养基各50μL，每个浓度4个平行对照孔，置于细胞培养箱中处理细胞72h，加入10μL CCK-8溶液，4h后用酶联免疫检测仪检测OD450值，测定低、中、高浓度干预组OD450值。

4、肿瘤杀伤实验