[发明专利]一种基于高效液相色谱法检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法

权利要求书

1.一种基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，小麦经提取，免疫亲和柱净化，得待测液；待测液经HPLC检测，获得小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量；

HPLC的检测条件为：色谱柱为C18反相柱；流动性为24～26v％的甲醇水溶液；检测波长为235～241nm。

2.如权利要求1所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，流动性为25v％的甲醇水溶液。

3.如权利要求2所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，检测波长为240nm。

4.如权利要求3所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，所述的色谱柱长度为150mm，柱内径4.6mm，粒径5μm。

5.如权利要求4所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，所述的色谱柱为安捷伦ZORBAX Eclipse PAH-C18。

6.如权利要求5所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，流动性流速为0.8～1.0mL/min。

7.如权利要求6所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，HPLC的柱温为30～35℃。

8.如权利要求7所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，进样量：40～50μL。

9.如权利要求1～8任一项所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，待测液获得过程为：将小麦粉分散在聚乙二醇水溶液中，浸润后经固液分离，得DON提取液；DON提取液流经并吸附在DON免疫亲和柱中，随后依次经PBS缓冲盐溶液、水淋洗去除杂质，最后经甲醇洗脱，得DON净化液；DON净化液脱甲醇后用流动相稀释，得所述的小麦待测液。

10.如权利要求9所述的基于高效液相检测小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：DON标准溶液的配制

准确移取适量DON标准储备溶液用初始流动相稀释，配制成50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL、5000ng/mL的标准系列工作液；

步骤(2)：预处理

步骤(2-1)：样品提取：

称取5.00g小麦粉于50mL离心管中加1g聚乙二醇，加水20mL，混匀，置于多功能振荡器中振荡20min；5000r/min下离心5min，用玻璃滤纸过滤，收集得DON提取液；

步骤(2-2)：样品的净化、洗脱、浓缩：

将2.00mLDON提取液以每秒1滴的速度通过已恢复常温的DON免疫亲和柱，并分别用5mLPBS缓冲盐溶液(pH＝7.4)和5mL水先后淋洗免疫亲和柱，控制流速为每秒1滴～2滴，直至空气进入亲和柱中，弃去全部流出液，抽干小柱，准确加入2.0mL甲醇洗脱亲和柱，控制每秒1滴的速度，收集全部洗脱液至试管中，在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，加入1.0mL初始流动相，涡旋30s溶解残留物，0.45μm滤膜过滤，收集滤液为待测液，于进样瓶中以备进样；

步骤(3)：HPLC：色谱条件为：

色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse PAH-C18，柱长150mm，柱内径4.6mm，粒径5μm；流动相∶甲醇/水体积比为25∶75；流速：0.8mL/min；柱温：35℃；进样量：50μL；二极管阵列检测器：波长240nm，狭缝宽4nm；

测定步骤(1)的标准系列工作液，绘制标准曲线；测定小麦待测液，通过标准曲线，得出小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。