[发明专利]NKT细胞培养基、培养方法及二者的应用有效
| 申请号： | 201710932283.7 | 申请日： | 2017-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN107475194B | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 倪琳;金星;王秀娟 | 申请（专利权）人： | 天津长和生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 吴开磊 |
| 地址： | 301900 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | nkt 细胞 培养基 培养 方法 二者 应用 | ||
1.一种NKT细胞的培养方法，其特征在于，所述细胞培养方法为如下步骤：
(a)：采集人源外周血，将采集的外周血转移至50mL离心管中，于20℃温度下2000rmp，10min离心收集血浆备用；使用淋巴细胞分离液分离并收集外周血单个核细胞，收集后的单个核细胞用PBS清洗三次并计数，备用；
(b)：使用无血清第一基础培养基重悬步骤(a)提供的外周血单个核细胞，调整细胞浓度至1.5×106/mL，并接种至细胞培养瓶中；
(c)：加入5％自体血浆至培养瓶中，添加第一细胞因子；
(d)：细胞培养每3天进行补液，使用无血清第二基础培养基调整细胞密度为1.5×106/mL，补加5％自体血浆及第一细胞因子；
(e)：细胞培养至第7天后，每3天进行补液，使用无血清第二基础培养基调整细胞密度为1.5×106/mL，补加第二细胞因子；
(f)：细胞培养至第14天，收集细胞，PBS清洗3次，得到NKT细胞；
其中，所述第一基础培养基和第二基础培养基为无血清培养基；
所述第一基础培养基为X-VIVO 15；
所述第二基础培养基为AIM-V；
所述第一细胞因子为白细胞介素-2、白细胞介素-12、白细胞介素-15和白细胞介素-21；
所述第一细胞因子的加入量为白细胞介素-2 1000IU/mL、白细胞介素-12 5ng/mL、白细胞介素-15 20ng/mL和白细胞介素-21 10ng/mL；
所述第二细胞因子为白细胞介素-2和白细胞介素-15；
所述第二细胞因子的加入量为白细胞介素-2 1000IU/mL和白细胞介素-15 20ng/mL。
2.如权利要求1所述的NKT细胞的培养方法在培养NKT细胞中的应用。
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