[发明专利]由人类多能干细胞产生间充质干细胞的方法以及通过所述方法产生的间充质干细胞

权利要求书

1.一种由维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞产生间充质干细胞的方法，所述方法包括：

a)通过在不含bFGF的培养基中以悬浮状态培养维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞14天以形成聚集物；

b)使所述聚集物附着到培养皿以诱导所述聚集物自发分化为间充质干细胞；以及

c)以增殖性方式培养所述间充质干细胞，同时维持所述间充质干细胞的一致性，

其中成熟且商业化的人类多能干细胞不包含直接分离自人类胚胎或胚泡的人类多能干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在含有胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔培养基的碱性组分中培养步骤b)的所述聚集物，从而诱导其分化。

3.根据权利要求1所述的方法，其中通过在不添加外部细胞因子的情况下形成自体细胞因子回路而出现步骤b)的所述自发分化的诱导。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述自体细胞因子为骨形态发生蛋白(BMP)。

5.根据权利要求1所述的方法，其中通过使用含有人表皮生长因子、血管内皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、氢化可的松以及抗坏血酸的培养基来培养步骤c)的所述间充质干细胞。

6.一种间充质干细胞，其由根据权利要求1到5中任一权利要求所述的方法产生。

7.一种细胞治疗产品，其包括根据权利要求6所述的间充质干细胞。

8.根据权利要求7所述的细胞治疗产品，其中所述细胞治疗产品形成选自由脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、肌细胞、神经细胞以及心肌细胞组成的群组中的细胞。

9.一种使用由根据权利要求1到5中任一权利要求所述的方法产生的间充质干细胞的方法，其作为用于培养成熟且商业化的人类多能干细胞的饲养细胞，其中成熟且商业化的人类多能干细胞在没有添加bFGF的情况下维持在未分化状态。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞经受30次传代培养。

11.一种用于培养成熟且商业化的人类多能干细胞的饲养细胞，其包括由根据权利要求1到5中任一权利要求所述的方法产生的间充质干细胞，其中成熟且商业化的人类多能干细胞在没有添加bFGF的情况下维持在未分化状态。

12.一种用于由通过培养在未添加bFGF的情况下维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞形成的聚集物产生间充质干细胞的试剂盒，所述试剂盒包括：

a)胚胎干细胞培养基，其不含碱性成纤维细胞生长因子；

b)杜尔伯科改良伊格尔培养基，其含有体积比上体积为10％的胎牛血清；以及

c)培养基，其含有人表皮生长因子、血管内皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、氢化可的松以及抗坏血酸，

其中成熟且商业化的人类多能干细胞不包含直接分离自人类胚胎或胚泡的人类多能干细胞。

13.一种用于由维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞产生间充质干细胞的培养系统，所述培养系统包含：

a)在不含bFGF的培养基中以悬浮状态培养维持未分化状态的成熟且商业化的人类多能干细胞并选择培养14天的聚集物；

b)使所述聚集物附着到组织培养皿并通过使用含有胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔培养基培养基培养所述聚集物，从而诱导所述聚集物分化为间充质干细胞；以及

c)通过使用含有人表皮生长因子、血管内皮生长因子、人碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子、氢化可的松以及抗坏血酸的培养基维持并以增殖性方式培养所述间充质干细胞，

其中成熟且商业化的人类多能干细胞不含有直接分离自人类胚胎或胚泡的人类多能干细胞。