[发明专利]一种马铃薯茎尖脱毒方法

说明书

本发明提供一种马铃薯茎尖脱毒方法，包括以下步骤：A1、田间标记选择健康植株，并且选择大且薯型标准的健康种薯，将种薯的块茎打破休眠后，热处理6周，期间喷施水杨酸2次；A2、从步骤A1得到的薯块上剥取大芽，进行清洗；A3、无菌条件下切下大芽顶部1‑3mm，接入液体培养基，培养成试管苗。本发明方法简化了茎尖剥离的步骤，显著降低了茎尖剥离技术难度，使再生植株由弱苗变壮苗，变传统多步骤成苗为一步成苗，成苗时间为30天左右，缩短脱毒周期约33.3％‑60％，实现了从薯块到脱毒苗长周期变短周期的跨越；增加成苗率44％以上，改善了茎尖剥离成苗困难的现状；提高脱毒率36％以上，突破了马铃薯常规脱毒法PVS和PVM难以脱除的技术瓶颈。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种马铃薯茎尖脱毒方法。

背景技术

马铃薯在种植过程中感染病毒而引起退化直接影响了马铃薯的品质及产量,严重阻碍了马铃薯的生产和利用。马铃薯脱毒技术,是解决马铃薯种薯退化的主要技术措施。因此，脱毒种薯越来越受到广大马铃薯栽培者的欢迎。我国在马铃薯茎尖组织培养方面也取得了很多研究成果,并在各地建成脱毒种薯繁育体系。马铃薯茎尖组织培养脱毒苗是马铃薯脱毒种薯产业的基础,优质快速地茎尖培养为以后脱毒苗和脱毒薯的生产赢得了时间和效益。通过组织培养途径，从而建立无病毒生产体系是目前非常有效的获得无病毒植株的途径。然而当前脱毒马铃薯茎尖培养效率低,成苗率和脱毒率达不到预期目的,因此优化马铃薯茎尖脱毒培养方法非常必要。

目前现有的马铃薯茎尖脱毒标准程序如下：块茎、植株或芽条(或者带病毒试管苗)；结合热处理(36℃，16小时光照；8小时黑暗，30℃)；表面清洗之后，常规消毒处理；解剖镜下剥离分生组织约0.1-0.3mm、带1-2个初生叶原基；在无菌条件下操作；接入已灭菌的分生组织培养基培养(3-5个月)；待分生组织分化后，转入生长培养基成苗(15-20天)；具5-7叶的茎尖分化苗扩繁(15-20天转接一次)；各株系茎尖分化苗的病毒及类病毒检测；无病原菌的试管苗留作基础种苗；至少一个生长季节；经遗传稳定性鉴定后工厂化快繁用。

该技术是目前马铃薯茎尖脱毒的一般程序，但存在以下不足：

1、脱毒周期长、环节多。

2、对技术和设备要求高，需要解剖镜，茎尖剥离的操作很细致，茎尖不能过大或过小，过大脱毒率低，过小不易成活，一般要求0.1-0.3mm，带1-2个叶原基最宜。

3、脱毒苗可能发生变异，茎尖剥离后的愈伤培养会在培养基内加一些激素，分生组织受这些激素影响可能会产生遗传变异，并且马铃薯茎尖细胞小，有可能遗传物质不完全。

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷，提供一种马铃薯茎尖培养效率高、成苗率和脱毒率均比较高的马铃薯茎尖脱毒方法。

一种马铃薯茎尖脱毒方法，包括以下步骤：

A1、田间标记选择健康植株，并且选择大且薯型标准的健康种薯，将种薯的块茎打破休眠后，热处理6周，期间喷施水杨酸2次；

A2、从步骤A1得到的薯块上剥取大芽，进行清洗；

A3、无菌条件下切下大芽顶部1-3mm，接入液体培养基，培养成试管苗。

进一步地，如上所述的马铃薯茎尖脱毒方法，在步骤A3之后，还包括以下步骤：

A4、剪取试管苗上部三分之一保种，剩余三分之二进行病毒检测；

A5、病毒检测合格后，将所述上部三分之一保种的部分按照常规方法进行快繁。

进一步地，如上所述的马铃薯茎尖脱毒方法，步骤A1中水杨酸的浓度为45mg/L。

进一步地，如上所述的马铃薯茎尖脱毒方法，所述液体培养基的配方为：