[发明专利]ManLAM的制备方法及其在制备治疗自身免疫疾病的药物中的应用

说明书

本发明公开了ManLAM的制备方法及其在制备治疗自身免疫疾病的药物中的应用。通过从结核分枝杆菌中获得粗糖提取物，PBS溶解获得粗糖溶解物，行SDS‑PAGE电泳后，将整块分离胶置于3%预冷的氯化钾溶液中并轻轻摇动，分离胶上出现乳白色条带；对34 kD附近的条带进行切取；将切取的条带置于无菌研钵反复研磨，加入2倍体积的去离子水浸泡研碎的胶条；10000 g离心15 min取上清，并冷冻干燥，得到ManLAM纯度不低于95%。该ManLAM刺激的免疫细胞IL‑10上升，具有免疫调节作用，能下调机体免疫细胞Th1型极化，对所有Th1型极化上升的自身免疫疾病均有治疗作用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种从结合分枝杆菌中提取纯化ManLAM的方法，及其在制备治疗自身免疫疾病的药物中的应用。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmune diseases，ADs)是一类严重危害人类健康的慢性复杂性疾病，是由于机体免疫效应细胞如细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞等，或免疫效应分子(补体、抗体、细胞因子等)针对自身组织或细胞产生病理性免疫应答反应的一类慢性、异质性疾病，可累及特定的靶器官或多个系统。包括器官特异性自身免疫病(如胰岛素依赖型糖尿病)和系统性自身免疫病(如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎)等20余种疾病。但是目前自身免疫性疾病没有很好疗效的药物进行治疗。

自身免疫性疾病具有一些相同的临床特征、环境和遗传因素，这一现象被称作“自身免疫性同义反复”，表明ADs有着共同的病理生理学机制。当然，ADS并不是真的等同。因为每一种ADS都有着不同的靶细胞和靶器官。而且其触发因子和发病年龄也千差万别。其共同特征为机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害。目前确切的发病机制尚不明确，近年研究发现表观遗传异常所致免疫调控网络紊乱与自身免疫病发生、发展及其分子机制相关。目前认为，具有某种遗传特征(由AD相关基因多态性决定)的个体，由于某些内外致病因素刺激(自身抗原释放、变构及超抗原分子模拟等)或自身免疫反应细胞基因突变、修饰等原因，导致抗原提呈细胞(APC)或树突状细胞异常活化、免疫调节网络失衡(Th1/Th2平衡破坏)、自身免疫细胞多克隆活化或凋亡延迟等改变，从而可能发生自身免疫性疾病。自身免疫的启动与效应过程形成恶性循环，要恢复正常的免疫耐受机制十分困难。很多自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、硬皮病、皮肌炎、系统性硬化症等疾病常呈反复、迁延的难治过程，需要长期巩固治疗才能获得满意疗效。

正常人I类辅助性/II类辅助性CD4⁺ T细胞(Th1/Th2细胞）处于相对平衡状态，在机体免疫反应的调节中起关键作用。Th1细胞分泌白细胞介素(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-β (TNF-β)，主要介导细胞免疫反应；Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6等，主要介导体液免疫反应。人类Th1和Th2均可产生IL-10。Th1和Th2两种细胞亚群之间存在交互抑制作用，一旦CD4⁺ T细胞亚群向某亚群偏移，产生Th1/Th2细胞失衡，就可能导致自身免疫性疾病。Th1及其分泌的细胞因子主要参与细胞免疫介导的自身免疫性疾病，如I型糖尿病、多发性硬化、类风湿性关节炎、甲状腺疾病等，其作用机制主要是通过分泌的IFN-γ等细胞因子，激活细胞毒性淋巴细胞(CTL)，促进细胞凋亡和上调粘附分子表达，导致胰岛β细胞、甲状腺细胞等特异性组织器官的破坏。Th2细胞过度活化与系统性红斑狼疮(SLE)、过敏性疾病（如哮喘）的发病有关，其过度活化产生的IL-4、IL-5、IL-6或IL-10等细胞因子，诱导抗体大量异常产生或嗜酸性粒细胞浸润，导致过敏性疾病或体液免疫介导的自身免疫性疾病。