[发明专利]一种铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法

说明书

本发明涉及石斛无性繁殖技术领域。目的是提供一种育苗周期短、幼苗形成率高、操作流程简单的铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法。采用的技术方案是：通过植株筛选，从长势健壮的铁皮石斛上取茎尖或是带一个茎节的茎段作为外植体。制备培养基：以MS或者改良MS作为基本培养基，添加NAA、6‑BA、2,4‑D、琼脂粉、蔗糖、活性炭和土豆汁，调节pH值至5.8，于121℃，102.9kPa条件下灭菌30min。将外植体接种在培养基中，可直接从外植体中培育长出完整的幼苗植株。本发明育苗周期短，成本低，操作流程简单，培育的幼苗形成率高，能够保持母株的优良性状。

技术领域

本发明属于石斛无性繁殖技术领域，具体涉及一种铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法。

背景技术

石斛，是一种药用植物，味甘淡微咸，性寒，归胃、肾、肺经，具有益胃生津、滋阴清热的功效。现代药理学研究证明石斛中所含的石斛碱是良好的退热剂、镇痛剂，具有增强免疫力、延缓衰老、抗肿瘤等作用。石斛不仅具有极高的药用价值，还具有一定的观赏价值，在国际花卉市场占据重要的地位。

我国铁皮石斛资源丰富，以野生为主，但由于人为长期无节制地开采和破坏，以及自然环境的不断改变，近年来野生铁皮石斛资源急剧减少。同时,由于石斛种子无胚乳，自然萌发率很低，在野生条件下通常要在共生菌的帮助下才能萌发。且石斛种苗分株能力弱，繁殖系数低导致繁殖速度慢，进而致使野生铁皮石斛资源面临濒危。目前铁皮石斛已被列为国家重点保护药用植物、中国珍稀濒危二级保护植物和世界二类保护植物。

随着科学技术的不断进步，近年来，组织快繁、低温贮藏和低温保存已经成为实现繁殖和资源保存的重要手段。通过采用组织培养技术对铁皮石斛进行快速繁殖是现下保护铁皮石斛野生资源的研究热点。据外文杂志《In vitro Cellular&DevelopmentalBiology--Plant》(2008，4卷3期)公开的名为“Protocorm-like body(PLB)formation andplant regeneration from the callus culture of Dendrobium candidum Wall exLindl”以及“Zhao,P.,Wu,F.,Feng,F.S.S.,Wang,W.J.J.,2008.Protocorm-like body(PLB)formation and plant regeneration from the callus culture of Dendrobiumcandidum Wall ex Lindl.In Vitro Cellular&Developmental Biology:Plant 44,178–185.”的期刊论文中报道，愈伤组织在石斛组织培养过程中生长缓慢且容易褐化，难以实现铁皮石斛的大规模繁殖。现有技术中，公告号为102499092的专利公开了一种石斛的细胞组织繁育繁殖培养方法，该方法要通过多次转接培养，制备多个不同配方的培养基，培养周期长，这样难以通过该培养方法取得相应的经济效益，不利于实现对铁皮石斛优良品种进行保育和扩繁。

发明内容

本发明的目的是提供一种育苗周期短、幼苗形成率高、操作流程简单的铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：一种铁皮石斛无性繁殖快速成苗的方法，包括以下步骤：

1)、植株筛选：在生长期1年以上的铁皮石斛植株上，取带一个茎节的茎尖或是至少带一个茎节的茎段作为外植体；

2)、制备培养基：以MS或者改良MS作为基本培养基，添加NAA 0.2～3mg/L、6-BA0.5～1mg/L、2,4-D 0～5mg/L、琼脂粉6g/L、蔗糖30g/L、活性炭2g/L和土豆汁200g/L，调节pH值至5.8，于121℃，102.9kPa条件下灭菌30min；所述的改良MS为钙离子含量加倍的MS培养基；