[发明专利]一种用于检测氯霉素的复合物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测氯霉素的复合物及其制备方法，该复合物能成倍提高氯霉素ELISA检测试剂盒或氯霉素化学发光酶免疫检测试剂盒在检测食品样本中残留氯霉素的灵敏度；同时也可提高氯霉素ELISA检测试剂盒或氯霉素化学发光酶免疫检测试剂盒的生产稳定性和降低生产成本；其技术要点是：为生物素化抗氯霉素Fab‑碱性磷酸酶‑链霉亲和素‑碱性磷酸酶复合物产品。

技术领域

本发明公开了一种复合物及其制备方法，具体地说，是一种用于检测氯霉素的复合物及其制备方法。

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol,CAP)是一种应用广泛的抗生素。但氯霉素对骨髓和肝脏有严重的毒副作用，能抑制骨髓细胞和肝细胞线粒体的蛋白质合成，而引起人的再生性障碍性贫血，粒细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰婴综合症等疾病。目前，世界上欧美等发达国家己相继禁止或严格禁止使用。2002年12月中国农业部公告第235号文规定，氯霉素在所有食品动物的所有可食组织中不得检出。但由于氯毒素价格便宜且为广谱抗生素，违法使用仍很普遍。因此加强对动物性食品中氯霉素的残留检测是非常必要的。常用于氯霉素残留检测的方法除了有微生物法和仪器分析法外，免疫学检测法如ELISA或化学发光酶免疫分析技术灵敏度比微生物法高，样品前处理又比仪器分析法简单，适于现场监控和大量样本筛查。

目前，用于免疫学检测的抗体都是单克隆抗体或多克隆抗体。基因工程抗体如单链抗体(scFv)、单域抗体(VHH)和Fab片段抗体在小分子检测中的应用，给用于免疫检测的抗体提供了新的选择。特别是一些新型抗体，如抗体片段与酶或荧光蛋白的融合蛋白和双特异性抗体等，具备传统抗体所没有的一些功能和优点。同时在制备生产方面比传统抗体的制备生产成本更低，更适合大批量生产制备，这对保证检测试剂盒质量稳定性更为有利。

现有的专利文献或非专利文献记载的碱性磷酸酶与抗体融合蛋白，主要是单链抗体(ScFv)与AP融合蛋白的构建，如：CN103555732A，CN103014012A，CN105177016A；单域抗体与AP融合蛋白的构建；也有Fab与AP融合蛋白的构建。

由于单链抗体通常比原亲本完整抗体亲和性大为降低，应用受到限制。Fab-碱性磷酸酶融合蛋白的抗体亲和性通常与亲本抗体保持一致，有很好的应用前景。但在检测灵敏度要求更高的情况下，需要新型的抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的设计和制备。在一个抗体分子上标记多个酶分子或形成大的抗体-酶复合物，是实践证明行之有效的方案。如ABC(亲和素-生物素复合物)法，聚合物-酶复合物法(DAKO EnVision和迈新MaxVision)等，都是通过在一个抗体分子上连接多个酶分子来达到放大显色反应，从而提高检测灵敏度。

生物素与亲和素(avidin)和链霉亲和素(streptavidin)之间的结合，是已知的生物分子间亲和性最高(Kd～10^-14-15M)。生物素标记的抗体或抗原，与酶标记的亲和素或链霉亲和素组成的酶免疫放大系统是目前免疫生物检测技术中常用的高度敏感的系统。但体外生物素标记抗原或抗体是一个化学随机交联反应，交联位点和交联数量有随机性，导致方法的重复性和对抗原或抗体活性的影响难以确定。

发明内容

针对上述现有技术不足，本发明的第一个目的是提供一种生物素化抗氯霉素Fab-碱性磷酸酶融合蛋白和链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物，该复合物能成倍提高氯霉素ELISA检测试剂盒或氯霉素化学发光酶免疫检测试剂盒在检测食品样本中残留氯霉素的灵敏度；同时也可提高氯霉素ELISA检测试剂盒或氯霉素化学发光酶免疫检测试剂盒的生产稳定性和降低生产成本。

本发明的第二个目的是提供上述生物素化抗氯霉素Fab-碱性磷酸酶融合蛋白和链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物的制备方法。

为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：

一种用于检测氯霉素的复合物，所述的复合物为生物素化抗氯霉素Fab-碱性磷酸酶-链霉亲和素-碱性磷酸酶复合物产品。