[发明专利]一种新型川贝母内生真菌及其应用

权利要求书

1.一种新型川贝母内生真菌，其特征在于：是镰刀菌中的三线镰刀菌，其保藏登记号为CGMCC NO.9719，菌株编号为CBY4。

2.根据权利要求1所述的新型川贝母内生真菌，其特征在于：在PDA固体培养基上28℃培养，菌丝绒毛状，边缘初期光滑，随后呈波状，菌落呈圆形，新生菌丝呈白色，向 外生长，并渐变为桃红色，第3天时在边缘白色菌丝和菌落中央桃红色菌丝间出现淡黄色 同心圆状菌丝，生长到第10天，菌落由内到外呈现桃红色、淡黄色、桃红色、白色相间 同心圆，培养第十天其菌落直径为3.9±0.1cm，菌落厚度为0.2～0.5cm。

3.根据权利要求1所述的新型川贝母内生真菌，其特征在于：它的液体培养为：1)PDB培养基：250ml摇瓶中含发酵液100ml，接种6mm菌饼5块，摇瓶培养4天，培养温度28±1℃，震荡速率130r/min，暗室培养，作为扩大培养的种子液；然后再以PDB 为培养基，250ml摇瓶中含发酵液150ml，接种量为1％，培养7天；2)发酵培养特征：培养第1～3天有成棉花状菌丝出现，培养液澄清；培养第4天，棉花状菌丝增加增大，且棉花状条带出现成圆球局部膨大，发酵液澄清；第5～6天，发酵液有两种不同大小的球状菌丝，大球状菌丝直径为5～15mm，小球状菌丝直接为0.7～2mm，发酵液变浑浊；第7～8天，球状菌丝变大0.1～1mm；整个生长过程菌丝呈白色，发酵液由亮黄色变为淡黄色。

4.根据权利要求1所述的新型川贝母内生真菌，其特征在于：它的显微形态为：菌丝有隔；大型分生孢子镰刀形、纺锤形、宽镰刀形，为3隔～5隔，着生于分生孢子梗顶端，大小为28～40×3～4μm；小型分生孢子棒状或卵圆形，单孢、棒状孢子的大小为6～10×2～3μm，卵圆形孢子直径为2.2～4.1μm；厚垣孢子呈球形，壁光滑，间生或顶生，5～15个成串，直径为5～10×5～8.5μm。

5.根据权利要求1～4任一项所述的新型川贝母内生真菌的应用，其特征在于：它用于制备贝母辛和贝母素乙生物碱。

6.根据权利要求5所述新型川贝母内生真菌的应用，其特征在于：用于制备贝母辛和贝母素乙生物碱的制备方法包括下列步骤：

1)将川贝母内生真菌CBY4于PDA培养基活化4天后，取直径为6mm的菌块接种到PDB培养液中，置于28℃恒温摇床中130r/min培养4天；在将此发酵液接种到另一个PDB培养液中扩大培养，其接种量为1％；

2)发酵完毕，收集培养物过滤后，利用浓氨水将发酵液的pH调到9～11，然后用二氯甲烷萃取2～3次，每次加入二氯甲烷体积为发酵液体积的1/4；收集二氯甲烷，并置于水浴锅上用蒸发皿挥干，再用甲醇复溶残留物并用0.22μm的有机滤膜过滤即得贝母辛和贝母素乙生物碱。