[发明专利]检测在DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率的组合物

权利要求书

1.一种用于检测在DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率的组合物，所述组合物包括至少一种用于检测亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率的参考品核酸，和用于检测参考品核酸的引物和探针；

其中，所述参考品核酸如SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2所示；

用于检测SEQ ID NO: 1的引物F、R分别如SEQ ID NO: 3-4所示和用于检测SEQ ID NO:1的探针P1、P2分别如SEQ ID NO: 5-6所示；

用于检测SEQ ID NO: 2的引物F、R分别如SEQ ID NO: 3-4所示和用于检测SEQ ID NO:2的探针P1、P3分别如SEQ ID NO: 5和7所示。

2.一种用于检测在DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率的试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1所述的组合物。

3.一种用于检测在DNA甲基化检测中亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率的方法，所述方法包括以下步骤：

1）在待检测的样品DNA中加入参考品核酸；

其中，所述参考品核酸如SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 2所示；

其中，所述参考品核酸的加入量为10³-10⁵拷贝/μl样品DNA；

2）使用亚硫酸氢盐处理步骤1）得到的待检测的样品DNA和参考品核酸的混合物；

3）扩增步骤2）得到的产物中的参考品核酸，并使用探针检测，获得样品DNA中亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率；

用于检测SEQ ID NO: 1的引物F、R分别如SEQ ID NO: 3-4所示和用于检测SEQ ID NO:1的探针P1、P2分别如SEQ ID NO: 5-6所示；

用于检测SEQ ID NO: 2的引物F、R分别如SEQ ID NO: 3-4所示和用于检测SEQ ID NO:2的探针P1、P3分别如SEQ ID NO: 5和7所示。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤1）中，所述参考品核酸的加入量为10⁴拷贝/μl样品DNA。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤3）中，将步骤2）得到的产物与扩增酶和引物以及探针接触，使得所述产物中参考品核酸被扩增，并使用探针检测扩增产物；基于所述扩增产物的Ct值，检测亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率。

6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率由使用不同的探针检测经步骤2）处理后的参考品核酸的循环阈值Ct值来确定。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，对于如SEQ ID NO: 1所示的参考品核酸，所述亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率使用如下的计算公式确定：

亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率=探针P1检测的DNA量/（探针P1检测的DNA量+探针P2检测的DNA量） = 2^-Ct(P1)/（2^-Ct(P1)+2^-Ct(P2)）× 100%。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，对于如SEQ ID NO: 2所示的参考品核酸，所述亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率使用如下的计算公式确定：

亚硫酸氢盐处理DNA的转化效率=探针P1检测的DNA量/探针P3检测的DNA量= 2^-Ct(P1)/2^-Ct(P3)× 100%。