[发明专利]一种重组乙酰化赖氨酸精氨酸N端蛋白酶及其制备方法和应用有效
申请号: | 201710942714.8 | 申请日: | 2017-10-11 |
公开(公告)号: | CN109652397B | 公开(公告)日: | 2022-02-25 |
发明(设计)人: | 徐平;王富强;张俊令;赵明治;常蕾 | 申请(专利权)人: | 北京蛋白质组研究中心 |
主分类号: | C12N9/52 | 分类号: | C12N9/52;C12N9/96;C12N15/70;G01N33/68 |
代理公司: | 北京律诚同业知识产权代理有限公司 11006 | 代理人: | 黄韧敏 |
地址: | 100000 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 重组 乙酰化 赖氨酸 精氨酸 蛋白酶 及其 制备 方法 应用 | ||
本发明提供了一种重组乙酰化赖氨酸精氨酸N端蛋白酶、其制备方法以及在蛋白质组学研究中的应用。所述重组乙酰化赖氨酸精氨酸N端蛋白酶降低了自身的自消化特性,提高了自身的稳定性,具有更高的酶活性。所述重组乙酰化赖氨酸精氨酸N端蛋白酶可单独或联合其它蛋白酶使用,提高蛋白鉴定序列覆盖度、胰蛋白酶消化成对镜像肽段和被鉴定肽段可读氨基酸残基顺序的覆盖度,是一种有潜力的蛋白组学工具酶。
技术领域
本发明属于蛋白质组学领域,具体涉及一种蛋白质组学研究中使用的蛋白酶。
本发明还涉及该蛋白酶的制备方法以及其在蛋白质组学研究中的应用。
背景技术
蛋白质组是细胞、组织或器官中所有蛋白的总和,是基因转录、翻译及翻译后修饰的最终结果。研究细胞中蛋白质的丰度、功能、相互作用、定位和调控对我们理解生命的奥秘至关重要。
在目前最为普遍的基于质谱的蛋白质组学研究中,蛋白质及翻译后修饰的鉴定需要先把蛋白样品酶解成肽段,经质谱检测得到一级谱图,再由肽段离子与惰性气体在质谱阱中进行碰撞,生成碎片离子,质谱检测得到二级谱图。然后用实验谱图和基于已有蛋白质和基因组数据库推导出的理论谱图进行匹配(称为搜库),推断出待测肽段的氨基酸顺序。利用鉴定的肽段反推出待鉴定蛋白质。该方法也被称为鸟枪法(shotgun)。其中,将蛋白质酶解成肽段的步骤是目前蛋白质组学研究的核心步骤。
胰蛋白酶作为蛋白质组学研究中最常用的蛋白酶在实践中得到了广泛应用。一方面,其酶切效率和特异性较高,可特异地在蛋白质底物的赖氨酸和精氨酸的羧基端进行酶切水解,(但当赖氨酸和精氨酸后的氨基酸是脯氨酸时,水解不会发生)。另一方面,其酶切形成的以精氨酸或赖氨酸结尾的短肽比较适合肽段的离子化和碎裂,形成较强的y和较弱的b系列离子对,适合分离和鉴定。但是,由于胰蛋白酶酶切形成的很多肽段不能被质谱鉴定,从而使得总体的覆盖度较低[Swaney DL,Wenger CDCoon JJ Value of usingmultiple proteases for large-scale mass spectrometry-based proteomics.JProteome Res 2010,9,1323–1329.];另一方面,胰蛋白酶对存在翻译后修饰(如甲基化、磷酸化、泛素化等)的酶切位点容易形成漏切,造成肽段的长度增加,离子化效率降低,从而影响对修饰位点的鉴定,不利于重要蛋白的功能分析。
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