[发明专利]利用紫色非硫光合细菌累积PHB的方法

说明书

技术领域

本发明涉及涉及微生物技术领域，更具体的说涉及一种利用紫色非硫光合细菌累积PHB的方法。

背景技术

聚-β-羟基丁酸酯(PHB)是微生物合成的一种高分子聚合物，由于具有生物可降解性、生物相容性以及光学活性，在医学、药学、农学、电子等领域具有广阔的应用前景。目前，利用微生物发酵生产PHB是较为成熟的方法，然而，微生物累积PHB的含量不高、累积PHB所需的效率低等，造成了PHB价格过于高昂，无法满足市场的需求。

发明内容

本发明目的就是提供一种高效累积PHB的方法。

为了实现本发明的这些目的和其他优点，一种利用紫色非硫光合细菌累积PHB的方法，其包括以下步骤：

1)构建发酵容器：在透明的密闭容器的外侧围绕着4组同轴设置的线圈，且中间两组线圈的间距为线圈半径的0.4864倍，两端两组线圈间距为线圈半径的1.8814倍，中间线圈箍数为与两端线圈箍数之比为2.2606，4组线圈相互串联后与交流电源开关连接，获得所述发酵容器；

2)接种：将发酵液添加到透明的发酵容器中，接种紫色非硫光合细菌并在白炽灯光照条件下进行密闭培养；

3)培养：紫色非硫光合细菌的培养密度大于5×10⁹个/mL时，往发酵容器中添加磁性发光材料、丙酮酸与亚硝基铁氰化钠，并使亚硝基铁氰化钠在发酵液中的浓度为0.06～0.15mg/L，打开所述电源开关使线圈在所述发酵容器内产生磁场并使磁感应强度为0.04～0.05T，持续培养4～8天，培养结束后过滤发酵液获得滤出物，所述滤出物重悬浮于pH为4～6的磷酸缓冲液中，并在振荡器上振荡10～30min，振荡结束后使用20～40目的滤布过滤，收集滤液获得高PHB含量的紫色非硫光合细菌。

优选的是，将丙酮酸4.00～6.00g，(NH₄)₂SO₄ 1.00～2.00g，KH₂PO₄ 1.00～2.00g，K₂HPO₄.3H₂O 1.00～2.00g，MgSO_4.7H₂O 120～180mg,CaCl₂.2H₂O 75～100mg,EDTA 20～40mg,VB₁ 1～3mg，烟酸1～3mg，维生素H 15～30ug，H₃BO₃ 2.8～4.5mg，ZnSO₄.7H₂O 240～300ug，MnSO₄.H₂O 1.6～3.2mg，Cu(NO₃)₂.3H₂O 40～60ug，Na₂MoO₄.2H₂O 750～900ug，溶解于1000mL蒸馏水中,调节pH至7.5-8.5,获得所述发酵液。使用丙酮酸作为碳源，不仅有利于紫色非硫光合细菌的生长，也有利于后期PHB的累积。

优选的是，所述紫色非硫光合细菌的接种量为培养液总体积的25％～40％。控制紫色非硫光合细菌的接种量，能抑制杂菌的生长，并能缩短紫色非硫光合细菌在发酵液中的适应期，使紫色非硫光合细菌的生物量能得到较快的累积。

优选的是，所述白炽灯的光照强度为3000～5000Lux。白炽灯的色光最接近于太阳光色，显色性好，光谱是连续而且平均的，拥有极佳演色性的优点，适合紫色非硫光合细菌的生长。