[发明专利]一种检测5种动物源性成分的四重荧光PCR方法

权利要求书

1.检测5种动物源性成分的四重荧光PCR方法，具有四重荧光PCR技术的4个要素，即：样品DNA、两套引物和四条探针、荧光PCR预混液、阳性对照；发明特点是根据田鼠、兔、马、驴的甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因设计引物和探针，仅能对目标序列进行扩增并激发荧光信号，对非目标序列无扩增和荧光信号；将待测样品DNA进行荧光PCR扩增的试剂配方和扩增条件制成试剂盒；所述5种动物是鼠、兔、马、驴、骡；具体的做法包括：

第一步，建立检测鼠、兔、马、驴、骡源性成分的四重荧光PCR引物和探针体系；

第二步，建立检测鼠、兔、马、驴、骡源性成分的四重荧光PCR试剂盒；

第三步，确定检测鼠、兔、马、驴、骡源性成分的四重PCR鉴定方法，即以待测样品总DNA为模板，利用所述的四重荧光PCR引物和探针体系，在可同时检测FAM、VIC、Cy3、Cy5荧光激发信号及BHQ1、BHQ2荧光淬灭信号的四通道及以上的多重荧光PCR仪上进行扩增和检测。

2.按照权利要求1所述的四重荧光PCR方法，其特征在于所述检测5种动物源性成分的四重荧光PCR引物体系：序列1为鼠、兔的通用上游引物，序列2为鼠、兔的通用下游引物，序列3为马、驴的通用上游引物，序列4为马、驴的通用下游引物，序列5为鼠特异性探针，序列6为兔特异性探针，序列7为马特异性探针，序列8为驴特异性探针。序列5、6、7、8在5’端分别用FAM、VIC、Cy3、Cy5荧光激发基团修饰；序列5、6的3’端均用BHQ1荧光淬灭基团修饰，序列7、8的3’端均用BHQ2荧光淬灭基团修饰。

3.按照权利要求1所述的四重荧光PCR方法，其特征在于所述检测5种动物源性成分的四重荧光PCR试剂盒成分如下所示：

①引物溶液：包括序列1、2、3、4所示引物，浓度均为20μmol/L；使用1.5mL无色透明离心管封装；

④探针溶液：包括序列5、6、7、8所示探针，浓度均为10μmol/L，使用1.5mL棕色不透明离心管封装；

③荧光PCR试剂：经验证可适用于所述的四重荧光PCR引物体系的外购的试剂套装，包括荧光PCR预混液、ROX染料、三蒸水；

④阳性对照：包括含有序列1、2、3、4所示引物扩增目的片段的鼠、兔、马、驴、骡源性DNA，浓度均为105拷贝/μL，使用1.5mL无色透明离心管封装。