[发明专利]一种测定血清中抗核抗体的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种测定血清中抗核抗体 (ANA)的试剂盒及其制备方法。

背景技术

自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)是由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身的组织和细胞成分,导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病，是目前世界上主要的致残性疾病之一。自身免疫性疾病发病率高，其全球人口总体发病率占总人口的3％-5％，在我国仅风湿病就有一亿多患者。抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)是AID的重要标志物，其对解释AID发病机理、诊断与鉴别诊断、病情监测与疗效观察及预后等起着重要作用。抗核抗体又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和 RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称。

目前检测ANA的金标准方法是间接免疫荧光法(Indirect Immune-Fluorescence，IIF)，但该方法读片耗时较长，而且结果的正确性和精确度很大程度上取决于阅片人的知识技术，主观性强。同时易受荧光片洗涤、荧光二抗浓度、荧光显微镜光强和分辨率的影响，且自动化程度低、操作标准化较难，可能会导致漏诊，或误导临床诊断。长期以来，ANA检测的全国室间质评结果也始终不能令人满意。此外，该方法检测所用的荧光显微镜等设备价值昂贵、操作复杂，很难在基层医院推广，从而导致很多基层医院的AID患者不能得到正确的诊断和治疗，最终可能致残甚至死亡。一些基于纯化抗原技术的检测方法如酶联免疫吸附法、免疫印迹法、化学发光法、悬浮微阵列以及液相芯片技术等也正不断应用于临床，这些方法自动化程度较高、易于标准化、方便大批量操作，但新方法也仍存在设备价值昂贵、操作复杂、难以在基层医院推广等问题。

发明内容

针对上述现有技术中的不足，本发明要解决的技术问题是提供一种测定血清中抗核抗体(ANA)的试剂盒及其制备方法。该试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法技术，使ANA检测可以在生化分析仪上开展；依托于生化分析仪高稳定性及完善的自动化操作，使ANA检测可以快速进行，结果快速稳定，方便客户使用。

为实现上述目的之一提供一种测定血清中抗核抗体的试剂盒，本发明采用了以下技术方案：

一种测定血清中抗核抗体的试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和校准品；

所述R1试剂包含缓冲液、电解质、表面活性剂、稳定剂、反应增强剂、防腐剂；

所述R2试剂包含缓冲液、电解质、表面活性剂、稳定剂、防腐剂和包被ANA抗原的致敏聚苯乙烯胶乳颗粒；

所述校准品包含缓冲液、表面活性剂、稳定剂、防腐剂和抗核抗体。

优选的，所述R1试剂、R2试剂及校准品中所使用的缓冲液选用Tris 缓冲液、甘氨酸缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或PIPES 缓冲液；

所述R1试剂、R2试剂中所使用的电解质为无机盐，选用氯化钠、氯化镁或氯化钾中的任一种或多种；

所述R1试剂、R2试剂及校准品中所使用的表面活性剂为Tween20、 Tween40、Tween60、Tween80、TritonX-100、Span40、Span80中的任一种或多种；

所述R1试剂、R2试剂及校准品中所使用的稳定剂为蛋白质、金属螯合剂、混悬剂和抗氧化剂中的任一种或多种；

所述R1试剂中所使用的反应增强剂是聚乙二醇4000～600000、聚凝胺、葡聚糖的任一种或多种；

所述R1试剂、R2试剂及校准品中的防腐剂是叠氮钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、亚硝酸钠、Proclin300、Proclin950中的任一种或多种。

进一步的，所述R1试剂、R2试剂及校准品所用稳定剂中的蛋白质为小牛血清、牛血清白蛋白或明胶；金属螯合剂为含有氨基二乙酸基团的螯合剂 EDTA、EGTA、EDTP、DTPA中的任一种或几种；混悬剂为蔗糖、麦芽糖、乳糖、乙二醇、丙三醇中的任一种或多种。

优选的，所述致敏聚苯乙烯胶乳颗粒表面通过交联剂修饰；其中致敏聚苯乙烯胶乳颗粒采用羧基化或氨基化的聚苯乙烯胶乳颗粒；对于羧基化的胶乳颗粒，交联剂采用碳二亚胺(EDC或EDAC)；对于氨基化的胶乳颗粒，交联剂采用戊二醛或N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)；通过交联剂活化后再进行ANA 抗原的包被。

进一步的，胶乳颗粒的直径为70～400nm，浓度为0.1％～0.5％。