[发明专利]杰克贝尔氏粉蚧特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体的，本发明涉及杰克贝尔氏粉蚧特异性SS‑COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒。该引物提高了检测的准确性和灵敏度，节约了检测时间，在杰克贝尔氏粉蚧检测监测方面具有很高的应用价值，可以试剂盒的形式在我国口岸、蔬菜和水果生产基地、鲜切花和苗木生产基地，以及水果、蔬菜、观赏植物、果树种苗/植株调运中推广。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的，本发明涉及杰克贝尔氏粉蚧特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

杰克贝尔氏粉蚧(Jack Beardsley mealybug)Pseudococcus jackbeardsleyiGimpelMiller属半翅目、粉蚧科、粉蚧属，是我国进境水果上一种具有重要检疫意义的有害生物，寄主范围十分广泛。随着中国东盟自由贸易区政策的推进，我国从东南亚进境的水果越来越多，杰克贝尔氏粉蚧入侵的风险越来越大，因此，加强对杰克贝尔氏粉蚧的检测监测，是保障我国水果、蔬菜和花卉产业健康发展的必要前提。

目前国际上用于杰克贝尔氏粉蚧鉴定的方法主要有：1)形态特征鉴定；2)DNA序列测定法等。但目前尚没有针对杰克贝尔氏粉蚧标准的检测方法。

SS-COI PCR技术检测是在mtDNA COI技术的基础上发展起来的特异序列扩增区域标记，是利用特异性的引物，根据预期DNA条带的有无来判断检测结果，无需测序和序列比对，具有高灵敏度、特异性强、快速、简便且重现性好和稳定性强等优点。

发明内容

本发明的目的为提供杰克贝尔氏粉蚧特异性SS-COI引物对。

本发明的再一目的为提供一种杰克贝尔氏粉蚧特异性基因片段。

本发明的另一目的为提供一种杰克贝尔氏粉蚧的特异性快速PCR检测方法。

本发明的再一目的为提供一种杰克贝尔氏粉蚧的特异性快速PCR检测试剂盒。

本发明根据杰克贝尔氏粉蚧的线粒体DNA序列，设计筛选出了一对特异性引物，该对引物只对杰克贝尔氏粉蚧具有扩增能力。是对杰克贝尔氏粉蚧形态学检测鉴定和mtDNACOI技术检测方法的补充和改进。同时，该方法采用SS-COI技术，提高了检测的准确性和灵敏度，节约了检测时间，在杰克贝尔氏粉蚧检测监测方面具有很高的应用价值，可以试剂盒的形式在我国口岸、蔬菜和水果生产基地、鲜切花和苗木生产基地，以及水果、蔬菜、观赏植物、果树种苗/植株调运中推广。

根据本发明的杰克贝尔氏粉蚧特异性SS-COI引物为：

引物PJZWF1：5’-GTACCATTAATAATAATATCTAG-3’；和

引物PJZWR1：5’-ATGTAACAATAATAGATCAAATATAAAGTGT-3’。

根据本发明的杰克贝尔氏粉蚧特异性基因片段的核苷酸序列如SEQID No.3所示。

根据本发明的杰克贝尔氏粉蚧特异性检测方法包括使用上述SS-COI引物进行PCR扩增的步骤。

根据本发明的杰克贝尔氏粉蚧特异性检测试剂盒包括上述杰克贝尔氏粉蚧特异性SS-COI引物。

本发明的杰克贝尔氏粉蚧种特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法，用于快速检测杰克贝尔氏粉蚧。与国际现有方法相比，本发明具有以下的技术优势：

(1)检测准确性高，利用本发明的杰克贝尔氏粉蚧种特异性SS-COI标记引物PJZWF1和PJZWR1，在PCR快速检测杰克贝尔氏粉蚧时，可扩增出319bp的片段，不仅对杰克贝尔氏粉蚧单头成虫、2龄和3龄若虫可以进行检测，对于单粒卵和单头初孵若虫也能准确检测。

(2)操作简便快捷，本发明采用PCR技术，操作过程简单、快速、高效。一般整个过程可在4小时内完成。