[发明专利]柯萨奇病毒A10驯化株TA151R-1感染动物模型的建立和评价

说明书

本发明专利申请公开了一株高滴度、传代稳定的柯萨奇病毒株A10驯化株TA151R‑1，该病毒株能够感染RD细胞、HEK293细胞、Vero细胞、MRC‑5细胞、Hep‑2细胞以及WI‑38细胞等多种细胞系，还可以用于制备单价或多价疫苗，制备得到的疫苗能够保护机体免受柯萨奇病毒的伤害，并且也能够完全保护其他异源病毒的攻毒，还可高效的建立感染动物模型。

技术领域：

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及柯萨奇病毒A10驯化株TA151R-1感染动物模型的建立和评价。

背景技术：

手足口病(Hand,foot,and mouth disease，HFMD)是一种由小RNA病毒引起的肠道传染性疾病，发病者主要是5岁以下婴幼儿，主要引起粘膜疱疹、咽峡炎等轻微临床症状，也能够引起重症，导致严重的无菌性脑膜炎和急性弛缓性麻痹等神经系统疾病。自2009年流行以来，柯萨奇病毒A组6型(A6)和10型(A10)在西太平洋地区和欧洲某些国家其发病率逐年升高，包括新加坡、泰国、日本、西班牙、法国和中国大陆及台湾地区，使其成为引发HFMD的主要病原体。作为非-EV71和非-A16，A6和A10被认为是其它型肠道病毒中引起HFMD的主要病原体，并在引发HFMD的病原体中所占比例越来越大。例如，一份最近的流行病学调查报告显示2011～2015年间重庆21615名HFMD患儿中由A6和A10所引起的比例分别为62.33％和4.79％。

目前为止，临床治疗A10重症患儿主要采取支持疗法的对症治疗，并未进行抗病毒治疗，更为关键的是还没有一种合适的A10疫苗预防接种儿童，另外，目前尚不明确A10的感染病理机制，获得一株稳定高效的A10病毒株是开发疫苗以及建立动物感染模型的关键。本发明人在之前的工作中筛选到了A6病毒株WF057R，并利用其进行了感染动物模型的建立以及抗A6药物的制备(CN106947745A、CN106867974A、CN106994182A)。

现在对柯萨奇病毒的研究较多，但是，关于A10病毒株的报道较少。庄再成等人在CN106661102A中公开了A10病毒株M2014，但是，该病毒株仅能感染HEK293细胞，而不能感染其他用于疫苗生产的细胞株，如，Vero细胞、MRC-5细胞、MDCK细胞以及CHO细胞，病毒力价最高只能到2.5×10⁸TCID₅₀/mL，在很大程度上限制了该病毒株的应用。我们在前期的工作中筛选得到了A10病毒株TA151R，建立了A10的乳鼠感染模型，并制备了全病毒灭活疫苗(“Protective Efficacies of Formaldehyde-Inactivated Whole-Virus Vaccine andAntivirals in a Murine Model of Coxsackievirus A10Infection”，Zhenjie Zhang等，《Journal of Virology》，2017年第91卷，e00333-17)；但是，在后续研究过程中，我们发现TA151R病毒株在传代过程中会出现滴度降低、传代不稳定的问题，影响了该病毒株在实际应用时的效率。

为了提高A10病毒株TA151R的滴度以及传代稳定性，我们对该毒株进行了驯化，筛选得到一株高滴度、传代稳定，并且能够感染多种细胞系的驯化株TA151R-1，该驯化株可高效用于疫苗的开发以及动物感染模型的建立。

发明内容：

本发明中所涉及的技术以及科学术语，如无特殊说明，均属于本领域技术人员所知的常规定义。

本发明一方面提供了一株高滴度、传代稳定的A10型柯萨奇病毒驯化株TA151R-1，该驯化株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13394，分类命名为柯萨奇病毒(Coxsackievirus)A10型，病毒株编号为TA151R-1，保藏日期为2016年12月26日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。