[发明专利]模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法

权利要求书

1.一种模拟异常血流力学刺激对瓣膜细胞钙化作用的方法，其特征在于：

S1，从主动脉瓣组织中采用胶原酶消化法提取瓣膜间质细胞制成细胞上清培养基；

S2，将磁珠与RGD肽原液混合制得附着有RGD肽的磁珠；

S3，将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中，弃上清，PBS清洗后加入第一培养基中培养；将所述第一培养基放入磁力扭曲仪中，通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激，观察瓣膜间质细胞的钙化状态；所述第一培养基为血清浓度1％的钙化培养基；所述磁力大小为为2.185Pa～26.25Pa；

具体地：

步骤S1包括：

S101，取猪心，尽量无菌条件下剪下主动脉瓣，泡在高糖溶液中；

S102，用添加舒普深和两性霉素的无菌PBS反复冲洗瓣膜后，将瓣膜至于含舒普深和两性霉素的I型胶原酶中消化，无肉眼可观的组织残渣后，离心去除上清，加入血清浓度10％的完全培养基中培养；

S103，取瓣膜间质细胞，采用胰酶消化法消化，待大部分细胞漂起后，用血清浓度10％的完全培养基中和，离心去除上清，再加入血清浓度1％的钙化培养基制成细胞上清培养基；

步骤S2包括：

S201，取置于无水乙醇中的磁珠于EP管中，离心去除上清；

S202，加入无水乙醇，并用超声清洗；

S203，置于旋转仪中，在4摄氏度条件下保存过夜；

S204，离心去除上清，打开EP管盖，待剩余酒精自然挥发；

S205，加入碳酸盐缓冲液；

S206，加入RGD肽原液，制得附着有RGD肽的磁珠，置于旋转仪中，在4摄氏度条件下保存；

步骤S3包括：

S301，取步骤S2制得的附着有RGD肽的磁珠，离心去除上清，用PBS重悬；

S302，将附着有RGD肽的磁珠加入步骤S1制得的细胞上清培养基中培养，弃上清并进行PBS清洗后，加入所述第一培养基中培养；

S303，将步骤S302培养后的所述第一培养基放入MTC仪器，通过调节磁力扭曲仪的磁力大小、频率和磁力作用时间模拟异常血流对瓣膜间质细胞的力学刺激，观察瓣膜间质细胞的钙化状态。