[发明专利]一种苹果腐烂病病原菌快速接菌及致病力快速鉴定的方法

权利要求书

1.一种苹果腐烂病病原菌快速接菌及致病力快速鉴定的方法，其特征在于按下列步骤进行：

苹果腐烂病病原菌的培养：

a、采用PDA平板培养腐烂病病原菌，用直径5mm打孔器在黑腐皮壳菌Valsa mali 03-8的菌落边缘打孔，所取下来的菌饼接种在PDA平板的中央，温度25℃暗培养3天待用，其中所用菌株黑腐皮壳菌Valsa mali 03-8为腐烂病的强致病力菌株；

枝条接菌处理：

b、选取健康的新疆野苹果、栽培苹果或栽培海棠枝条，截成15cm长的小段，水冲洗干净后用浓度为70%酒精浸泡10min，然后用无菌水冲洗、晾干，枝条两端用石蜡封口待用；

c、用浸泡浓度为70%酒精的脱脂棉球擦拭消毒划布轮，待酒精晾干用划布轮刺伤树皮，刺伤长度至2cm，备用；

d、用打孔器在已培养好的PDA培养平板上打孔，取步骤a得到的菌饼贴在步骤c的刺伤部位，在接种上方0.5cm处覆一块脱脂棉，用移液枪在棉球上方悬空滴加800μl的无菌水使棉球浸湿，再用封口膜将其和接种体同时包扎；

e、将滤纸浸湿铺平托盘，再将步骤d已接好菌的树枝平放置托盘，用保鲜膜覆盖好托盘，保持湿度，放置温度25℃培养8天后，记录枝条发病个数并用游标卡尺测量病斑长度；

叶片接菌处理：

f、选取生长完全展开的新疆野苹果、栽培苹果或栽培海棠叶片，大小均一，连叶柄处剪下，用自来水洗干净，用浓度为70%的酒精擦拭消毒叶片表面，再用已灭菌的二次水冲洗干净叶片表面酒精，在超净工作台中晾干待用；

g、在培养方皿中平铺滤纸，加入已灭菌的二次水使滤纸完全浸湿，再弃去多余水，放入步骤f的叶片；

h、用划布轮沿叶片主叶脉方向，远离主叶脉，划伤叶片2cm长的伤口，再将步骤a的菌饼贴放在刺伤伤口处，盖好培养皿，用封口膜封住培养皿以便保湿，温度25℃培养4天后，用叶面积扫描仪记录病斑面积与叶片面积；

发病情况统计：

i、侵染处理后第8天，按常规方法测量并统计枝条发病数以及各发病空病斑长度，根据记录的枝条病斑长度，计算出枝条发病率和平均病斑长度；

j、侵染处理后第4天，按常规方法用叶面积扫描仪测量病斑面积和叶片面积，根据记录的叶片病斑面积和叶面积，计算出叶片病斑比率。

2.根据权利要求1所述一种苹果腐烂病病原菌快速接菌及致病力快速鉴定的方法，其特征在于步骤c和步骤h中用划布轮刺伤枝条和叶片表面，形成大小均一的刺伤伤口。