[发明专利]一种超敏C反应蛋白的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种C反应蛋白的检测方法，具体涉及一种超敏C反应蛋白的检测方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)因其能和肺炎双球菌的细胞壁的C多糖起沉淀反应而得名,是相对分子质量为115-140KD的血清β球蛋白。CRP持续增高提示机体存在慢性炎症或自身免疫疾病，CRP在病毒感染时不会升高，其变化不受患者的个体差异、机体状态和治疗药物的影响。近年来，随着检测技术的进步，采用超敏感方法检测到的CRP被称为超敏CRP(hs-CRP)。大量的文章研究显示，它在冠心病、中风、周围血管栓塞等疾病诊断和预测中发挥越来越重要的作用，甚至被认为是心血管病危险评估的“金标准”。

在许多的国家，冠状动脉心脏疾病(CHD)仍然是发病率和死亡率最高的疾病，但是常规的危险因子诊断将会漏掉相当数量的会得心肌梗塞的患者。事实上，在Framingham心脏研究中心进行治疗的心肌梗塞患者中，仅有50％的血清中的胆固醇的含量明显的升高。幸运的是，在过去的10年中，我们所认识的由于动脉硬化症引起的冠状动脉疾病的诊断得到了很大的提高，并且越来越多的证据表明C反应蛋白是冠状动脉疾病诊断的非常好的指示物。以前，我们认为冠状动脉疾病仅仅是由于脂肪沉积在动脉壁上引起的。但是，今天，这种疾病被认为是多种因素共同参与的一个过程，其中慢性炎症起着重要的作用。最近的研究表明C反应蛋白是炎症的非常好的指示物，当显著增加时，它也是冠状动脉疾病的很好的指示物。事实上，几个美国和欧洲的预期的研究表明C反应蛋白的浓度在正常参考范围内时，在明显健康的个体中，可以预测将来发生冠状动脉疾病的可能性。

超敏C反应蛋白是临床实验室采用了超敏感检测技术，能准确的检测低浓度C反应蛋白，提高了试验的灵敏度和准确度，是区分低水平炎症状态的灵敏指标,血清hs-CRP水平与动脉粥样硬化及急性脑梗死(ACI)的发生、严重程度及预后密切相关。有研究显示,在急性脑梗死老年患者中,CRP升高者预后不佳；hs-CRP含量与梗死面积、神经功能缺损程度相关,是脑梗死患者病变程度的指标之一；而且CRP也参与了血栓形成和动脉硬化的病理过程,是脑卒中的危险因素之一。动脉粥样硬化斑块的炎症反应是斑块破裂和不稳定的重要原因,在动脉粥样硬化斑块的形成过程中,CRP、补体复合物和泡沫细胞等沉积在动脉壁内,CRP可与脂蛋白结合,激活补体系统,产生大量炎症介质,释放氧自由基,造成血管内膜损伤、血管痉挛及不稳定斑块脱落,加重动脉粥样硬化所致的管腔狭窄以及ACI的发生。近年来越来越多的证据表明,低水平CRP与心血管疾病的其他危险因素密切相关,如高血压、高脂血症；同时,CRP升高可增加高血压患者心脏病、脑卒中的发病率；因此,CRP是与动脉粥样硬化发生、演变和发展都有关的促炎因子。流行病学调查也显示,hs-CRP水平升高者发生急性脑卒中的几率是正常健康人的2倍,发生心肌梗死的几率是正常者的3倍。2003年欧洲高血压防治指南(ESH/ESC)正式推荐,高血压患者需检测hs-CRP水平。超敏C反应蛋白的临床指导作用主要表现在对心血管疾病，新生儿细菌感染，肾移植等方面。

然而，目前的超敏C反应蛋白的检测方法，类似的采用仪器测试各类方法学试剂中，酶联免疫法大约30-120min，胶乳免疫比浊法约15-30min，酶促化学发光法约15-60min；检测时间长，并且灵敏度不高，不能准确地检测患者的超敏C反应蛋白的含量，从而不能准确判断其患病情况，延误了时机。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种超敏C反应蛋白的检测方法，从而能够提高检测灵敏度，缩短检测时间，准确地确定检测患者的超敏C反应蛋白的含量。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种超敏C反应蛋白的检测方法，包括以下步骤：

1)通过样本稀释液将标准品制成标准测试样本，得到其发光信号值，然后以标准品的浓度为横坐标，信号值为纵坐标绘制成标准曲线；

2)制备链霉亲和素磁珠、标记物缓冲液、生物素标记的hs-CRP抗体和吖啶酯标记的hs-CRP抗体，所述标记物缓冲液为2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液；

3)再取适量的待测血清样品加入全自动发光免疫分析仪的反应杯中，并加入适量的步骤2)制备的生物素标记抗体、吖啶酯标记抗体、链霉亲和素磁珠温浴，测试发光值，得到待测血清样品的信号值，同时将适量的标准测试样本加入反应杯中作为对照进行测试；优选地，于37℃温浴3-9min，优选5-6min；