[发明专利]一种去除宿主细胞蛋白含量的亲和纯化工艺

说明书

本发明提供一种新的有效降低宿主细胞蛋白(HCP)含量的亲和纯化工艺，其具体步骤包括：步骤1、处理亲和填料，上样；步骤2、淋洗，使用pH值较低的缓冲液(3.9～5.6)，以及使用含有氯化钠、氯化钙和/或精氨酸盐酸作为添加剂的淋洗缓冲液2淋洗层析柱；步骤3、洗脱，使用不同pH洗脱缓冲液洗脱产品并收集产品。本发明所使用的材料去除HCP效果显著，适用范围广，可广泛适用于抗体类蛋白质亲和纯化工艺中，从而为有效控制抗体类药物中HCP的含量提供技术支持。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种有效去除FC融合蛋白及单抗宿主细胞蛋白含量的亲和纯化工艺。

背景技术

宿主细胞蛋白(Host Cell Protein，HCP)是指来源于宿主细胞的蛋白质成分，是制备抗体类药物(包括抗体及FC融合蛋白)过程中需要去除的杂质。由于HCP的主要成分是蛋白质，即使很小的剂量，都有可能引发机体产生过敏反应。此外，部分HCP本身具有蛋白酶活性，残留在抗体类药物中，可能导致蛋白药物降解，最终影响药效。如果残留的HCP与抗体类药物之间存在相互作用，有可能阻断抗体类药物的活性位点，也会导致药效降低。因此，在抗体类药物制备过程中，必须严格控制HCP的含量，一般要求最终药物中HCP的含量100ppm(pg/mg)。

为了降低抗体类药物制剂中宿主蛋白质的残留量，目前主要是通过采用纯化工艺，并结合一定的检测定量手段(主要是通过酶联免疫检测HCP含量，通过UV280的吸收值来检测抗体及FC融合蛋白浓度)，来控制抗体类药物生产过程中残留的HCP的动态变化过程。目前在抗体类药物制备过程中，去除HCP的纯化工艺主要包括：亲和层析、阴离子交换层析和阳离子交换层析，以及集聚物沉淀和中间品深层过滤等。其中，亲和层析作为在抗体类药物制备过程中的关键工艺步骤，不仅能够对产品实行直接捕获，而且能够特异去除大部分的宿主细胞蛋白及其它杂质。随着上游细胞培养工艺的不断改进，CHO细胞目的蛋白的表达量得到显著提高，但与此同时HCP的表达量也被提高了。而且部分HCP能够与目的蛋白产生相互作用，或者与填料基质非特异吸附，从而导致在亲和纯化工艺中这些HCP非常难以去除，大量的HCP与目的蛋白一起被洗脱和收集，进而对后续纯化工艺造成非常大的困难，甚至可能导致最终产品HCP的含量无法满足质控标准。

为了克服这一技术难题，最大限度的在捕获步骤降低HCP的含量，从而减轻后续纯化步骤的压力，本发明对亲和纯化工艺进行了系统优化，尤其在淋洗步骤改变淋洗的缓冲液的pH或者添加各种试剂，从而在不影响收率的前提下显著提高亲和纯化工艺对HCP的去除效率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，提供一种新的有效降低宿主细胞蛋白(HCP)含量的亲和纯化工艺，能够提高抗体类药物制备过程中亲和层析工艺去除HCP的效率，为FC融合蛋白及单抗类药物亲和纯化工艺提供更加可靠的选择。

为解决上述技术问题，本发明提供的一种去除宿主细胞蛋白(HCP)含量的亲和纯化工艺，通过将改变淋洗步骤2的pH,通过加入氯化钠、氯化钙、精氨酸盐酸中的至少一种作为淋洗2过程中的添加剂，降低HCP同目的蛋白及填料基质间的相互作用，从而起到去除HCP的作用。其具体步骤包括：

步骤1、处理亲和填料，上样；

步骤2、淋洗，使用pH 3.9～5.6的醋酸-醋酸钠缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、柠檬酸缓冲液或磷酸缓冲液的淋洗缓冲液2淋洗柱层析；

步骤3、洗脱，使用不同pH值的洗脱缓冲液洗脱产品并收集产品。

具体的，所述步骤1具体操作方法是：

1a、亲和填料装柱，用2-5倍柱体积的平衡缓冲液漂洗层析柱；

1b、然后用3-5倍柱体积的NaOH溶液消毒层析柱；

1c、用3-5倍柱体积的平衡缓冲液平衡层析柱；

1d、上样，让样品在柱上保留2-10分钟。