[发明专利]一种凋亡细胞的染色方法

说明书

本发明提供了一种凋亡细胞的染色方法，其包括步骤：(1)将切片脱蜡至水，利用染色液l进行染色0.2～5分钟；(2)利用乙酸水溶液溶液清洗后，利用磷钼酸水溶液处理3～8分钟，然后再用乙酸水溶液溶液进行清洗；(3)利用染色液Ⅱ染色10～30分钟，之后用乙酸水溶液溶液进行清洗；(4)进行脱水、透明处理后，进行封片即可；所述染色液l的配方为：酸性复红0.1～1g、丽春红0.1～2g、橘黄G 0.1～3g、0.2％醋酸300ml；所述染色液Ⅱ的配方为：亮绿或苯胺蓝0.1～1克、0.2％醋酸100ml。本发明能标识不同时期的凋亡细胞，更能全面显示组织细胞凋亡情况；本发明操作简单，染色成本低，适合推广应用。

技术领域

本发明属于细胞标识领域，具体涉及一种凋亡细胞的染色方法。

背景技术

凋亡是活体内单个或小团细胞的死亡，死亡细胞的质膜不破裂，不引发死亡细胞的自溶，也不引起急性炎性反应。凋亡的发生于基因调节有关，也有人称之为程序性细胞死亡。细胞凋亡是机体的一种基本生理机制，并贯穿于机体的整个生命活动过程，包括胚胎的发育、新旧细胞的交替、某些组织的正常退化与萎缩、或肿瘤细胞的自发抑制等。

目前，常规的凋亡细胞原位标识技术除了利用电镜观察之外，主要为染色法。

一般的染色法主要为HE染色法、MTT染色法、Giemsa染色法和TUNEL原位杂交染色法。其中，HE染色法的缺点是凋亡细胞与正常细胞胞核及胞浆着色均非常接近，只能通过胞体或胞核形态进行仔细的识别，在识别直观性上有较大缺陷。MTT染色法虽然也是一种效果较好的方法，如冯春琼等所报道的《细胞凋亡的MTT染色法检测》，但该方法仅适用于活体凋亡细胞的染色。Giemsa染色法也是近年来新提出的一种凋亡细胞染色方法，如刘海洋等报道的《Giemsa染色法标记脑组织凋亡细胞的可行性验证》，但该实验并未明确标识采用的何种免疫组化方法做对比验证，其标识凋亡细胞的可靠性还有待验证。TUNEL原位杂交染色法是常用的凋亡细胞染色方法，不过，该法具有如下缺点：染色过程中需要对组织切片进行消化处理，对切片组织结构造成一定程度的破坏；只能标识早期凋亡细胞；试剂价格昂贵，染色过程要求高，不易成功操作，常有假阴性结果出现。

因此，本领域亟需一种操作简单、效果优异的凋亡细胞染色方法。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种凋亡细胞的染色方法，该方法包括如下步骤：

(1)将切片脱蜡至水，利用染色液Ⅰ进行染色0.2～5分钟；

(2)利用乙酸水溶液溶液清洗后，利用磷钼酸水溶液处理3～8分钟，然后再用乙酸水溶液进行清洗；

(3)利用染色液Ⅱ染色10～30分钟，之后用乙酸水溶液进行清洗；

(4)进行脱水、透明处理后，进行封片即可；

所述染色液Ⅰ的配方为：

酸性复红0.1～1g、丽春红0.1～2g、橘黄G 0.1～3g、0.2％醋酸300ml；

所述染色液Ⅱ的配方为：

亮绿或苯胺蓝0.1～1克、0.2％醋酸100ml。

优选的，步骤(1)中，所述染色时间为5分钟；和/或，利用磷钼酸溶液处理时，处理时间为5分钟。

优选的，步骤(2)和/或步骤(3)中，所述乙酸水溶液的中乙酸的体积分数为0.2％。

优选的，步骤(2)和/或步骤(3)中，进行所述清洗时，清洗的次数为2次。

优选的，步骤(2)中，所述磷钼酸水溶液的浓度为5g/100ml。

优选的，步骤(3)中所述染色时间为30分钟。