[发明专利]一种动物心脏单细胞悬液的制备及检测方法

权利要求书

1.一种动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，该方法包含：

步骤1：制作动物心脏缺血再灌注模型；

步骤2：取动物离体心脏组织，冲洗去除血液，加入心脏消化液，剪碎，混匀消化；

步骤3：过滤步骤2得到的混合溶液，离心，去除上清液，终止消化，加入磷酸盐缓冲液悬浮，加入红细胞裂解液，离心，去除上清液，加入磷酸盐缓冲液悬浮，得到动物心脏单细胞悬液。

2.根据权利要求1所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤2中，所述的心脏消化液包含：RPMI-1640培养基，Collagenase I和DNase；

所述的心脏消化液的质量：动物离体心脏组织的体积为1.8~2.2g：11mL。

3.根据权利要求2所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤2中，所述的RPMI-1640培养基的体积：Collagenase I的质量：DNase的质量=1mL：1.6mg：0.2mg。

4.根据权利要求3所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤2中，所述的动物心脏组织采用磷酸盐缓冲液冲洗以去除血液。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤2中，所述的消化在室温条件下进行，消化60min并间断混匀。

6.根据权利要求5所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤3中，所述的过滤采用140目的滤网。

7.根据权利要求6所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤3中，所述的离心的速度为1000~1200rpm，第一次离心的时间为10min，第二次离心的时间为5min。

8.根据权利要求6或7所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，在步骤3中，所述的混合溶液中加入的磷酸盐缓冲液与红细胞裂解液的体积比为1：10。

9.根据权利要求8所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法，其特征在于，所述的动物为小鼠。

10.一种动物心脏单细胞悬液的检测方法，其特征在于，该检测方法检测的动物心脏单细胞悬液通过如权利要求1-9中任意一项所述的动物心脏单细胞悬液的制备方法获得，该检测方法包含：

取动物心脏单细胞悬液，加入CD45、CD11c和Ly6C的抗体或同型对照，标记所述的动物心脏单细胞悬液中的白细胞，以及树突状细胞和单核细胞，磷酸盐缓冲液冲洗，避光，流式细胞检测；

选取所述的CD45的抗体或同型对照标记的白细胞，再分析CD45阳性细胞中被标记了CD11c，Ly6C的细胞亚群。