[发明专利]从阳性血分离细菌的试剂和方法及细菌鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于血液中细菌分离及鉴定领域，具体地，本发明提供从阳性血中分离细菌的试剂和方法及细菌鉴定方法。

背景技术

败血症(septicemia)是指致病菌或条件致病菌侵入血循环，并在血中生长繁殖，产生毒素而发生的急性全身性感染。对于败血症的诊断及治疗，需要将患者的血液进行细菌培养，然后进行细菌鉴定，才能根据鉴定结果给患者给药治疗。

常见的致病菌有金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎链球菌或肺炎克雷伯菌等，小儿及免疫功能低下者的致病菌可以是表皮葡萄球菌。

现有的细菌鉴定试剂及方法，通常需要等到第二天，甚至需要等待2-3天才能得到鉴定结果，然后才能进行后续的质谱鉴定及给病人给药等。鉴定所需时间长，病人得到治疗的时间延长，可能耽误治疗，医院工作效率有待提高。

公布号为CN102471798A的中国发明专利申请文件公开了主要涉及利用对来自血流感染(败血症)的血培养物中病原体的质谱鉴定。提供了一种方法，先用表面活性剂(SDS)溶解血液中的血细胞，然后离心或沉淀微生物，最后利用飞行之间质谱仪进行检测。溶解血细胞后，还可清洗、离心，然后离心或沉淀微生物。进一步指出，可用含有甲酸或三氟乙酸和乙腈的溶液分解微生物。用所述方法可以微生物病原体和人体血细胞分离，且通过对微生物的蛋白质谱的质谱测量直接进行鉴定。可实现快速鉴定。

但是，以上现有技术中，血液中细菌鉴定准确率有待进一步提高。

发明内容

为了克服以上现有技术中血液中细菌的鉴定的准确率有待进一步提高的问题，本发明提供从阳性血(含有细菌的血液)中分离细菌的试剂和血液中分离细菌的方法及细菌鉴定方法，细菌鉴定准确率高。

第一方面，本发明提供从阳性血中分离细菌的试剂，包括用于溶解来自血液培养物的血液样品中的血细胞(如红细胞、白细胞和血小板)的A剂，还包括用作清洗剂的B剂和用于破碎病原菌细胞壁，或，和促进细胞中的蛋白释放的C剂；所述A剂为皂素溶液和SDS中至少一种或其它可以裂解血细胞的表面活性剂。

优选的是，按与血液样品的体积比，A剂为5％以上，和/或，C剂为5％以上。

上述任一方案优选的是，按与血液样品的体积比，A剂为20％以上，和/或，C剂为20％以上。

上述任一方案优选的是，按与血液样品的体积比，A剂为30％以上，和/或，C剂为30％以上。

上述任一方案优选的是，按与血液样品的体积比，A剂为40％以上，和/或，C剂为40％以上。

上述任一方案优选的是，所述皂素溶液的浓度为1％以上。

上述任一方案优选的是，所述皂素溶液的浓度为5％以上。

上述任一方案优选的是，所述皂素为茶皂素、黄姜皂素、薯蓣皂素中至少一种。

上述任一方案优选的是，所述C剂包括甲酸和乙腈。

上述任一方案优选的是，所述甲酸和乙腈的用量相同。

上述任一方案优选的是，所述甲酸浓度为30％以上。

上述任一方案优选的是，所述乙腈的浓度99.8％。

上述任一方案优选的是，将所述试剂做成试剂盒。

上述任一方案优选的是，所述试剂还包括D剂，所述D剂为80-100％的甲酸。

上述任一方案优选的是，所述B剂为去离子水。

第二方面，采用第一方面所述的试剂从阳性血中分离细菌的方法，按实施顺序，包括以下步骤：

(1)向阳性血中加A剂混匀，室温静置5min以上；

(2)加入清洗剂B剂，混匀后离心；

(3)取上清液移到一新的离心管中，沉淀细菌,弃上清液；

(4)再次加入清洗剂B剂，洗涤后，取沉淀用于生化鉴定或彻底去除上清液并进行步骤(5)；

(5)加入C剂，机械振荡，短暂离心；

(6)取上清液作为用于质谱鉴定的样品。

优选的是，在步骤(1)之前，制备或获取第一方面所述的试剂。

上述任一方案优选的是，步骤(2)中，离心条件为@100-1000g，1分钟以上。

上述任一方案优选的是，步骤(3)中，沉淀细菌，弃上清液的操作为：@10000-15000g离心1分钟以上沉淀细菌，弃上清液。

上述任一方案优选的是，步骤(4)中，洗涤后，在@10000-20000g离心1分钟以上时间后彻底去除上清液。

上述任一方案优选的是，步骤(5)中，所述短暂离心是在@10000-20000g离心1分钟以上，得上清液。