[发明专利]利用二氧化碳加富和内生菌互作提高植物提取效率的方法

权利要求书

1.一种利用二氧化碳加富和内生菌互作提高植物提取效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以自来水预培养超积累植物东南景天，选取根系长度为1-2cm的幼苗，将其根系浸入内生菌复合菌液中接种2h；

所述内生菌复合菌液中包括红球菌属、布丘氏菌属、寡养单胞菌属和草螺菌属四种内生菌，其中红球菌属和布丘氏菌属的内生菌来源于超积累植物东南景天的根系，寡养单胞菌属和草螺菌属的内生菌来源于茎；内生菌复合菌液由四种内生菌的菌液按体积比1∶1∶1∶1混合而成，各菌液中的菌体含量为10⁹CFU mL^-1；

(2)将接菌处理后的东南景天幼苗移栽至装有营养液的黑色塑料桶中，营养液中的镉浓度为50μM，向营养液中添加内生菌复合菌液，使菌体浓度为10⁶CFU/ml；将黑色塑料桶放入植物生长箱中培养，培养过程保持生长箱中二氧化碳浓度为800μL·L^-1，每3天更换一次营养液，并使营养液中菌体浓度维持在10⁶CFU/ml；

(3)二氧化碳加富培养1个月后，收获超积累植物东南景天，分析生物量及镉提取量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述预培养是指：将超积累植物东南景天放置于人工气候室中，用自来水预培养1周；培养时控制光照周期为14小时光照，昼夜温度为25/20℃，人工气候室的相对湿度维持在白天70％和晚上85％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，四种内生菌的菌体通过下述方式获得：取超积累植物东南景天的茎和根系分别进行研磨，然后利用DF-ACC-Cd固体培养基对研磨液分别培养；挑选菌落进行划线，分别经纯化得到所述四种内生菌；

利用LB液体培养基活化上述四种内生菌，每种菌在25～35℃的条件下培养1～2天；将获得的菌液10000rpm离心5min，弃上清液；沉淀用无菌磷酸缓冲液清洗离心，去上清液，连续操作3次，沉淀部分即为菌体，加入适量无菌水，使菌液中的菌体含量为10⁹CFU mL^-1；将四种菌液以体积按1∶1∶1∶1混合后，用0.85％无菌NaCl溶液调细菌悬浮液OD₆₀₀为1.0-1.2，即得到内生菌复合菌液，此时菌液浓度为10⁹CFU mL^-1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述营养液的配方为：K₂SO₄，0.7mmol/L；KCl，0.1mmol/L；Ca(NO₃)₂·4H₂O，2mmol/L；MgSO₄·7H₂O，0.5mmol/L；KH₂PO₄，0.1mmol/L；H₃BO₃，10μmol/L；MnSO₄·H₂O，0.5μmol/L；ZnSO₄·7H₂O，0.1μmol/L；(NH₄)₄MoO₂₄·4H₂O，0.01μmol/L；20μmol/LFe·EDTA溶液中；用NaOH或HCl调整营养液pH5.8。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中植物生长箱的控制条件为：湿度70％，昼夜温度25℃和20℃，白天光照100μmol·m^-2·s^-1，每天光照14个小时。