[发明专利]一种丛枝菌根真菌的保藏方法

权利要求书

1.一种丛枝菌根真菌的保藏方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用湿筛倾析法和蔗糖离心法从盆栽扩繁菌剂中分离得到丛枝菌根真菌孢子，消毒后制得丛枝菌根真菌孢子悬浮液；

(2)以海藻酸钠、明胶、卡拉胶和聚乙烯醇作为载体，灭菌后，将所述孢子悬浮液包埋到载体中得到菌剂混合物；

(3)将所述菌剂混合物通过物理挤压方式滴入无菌交联剂中制成球状物，固化清洗后得到丛枝菌根真菌包埋小珠；

(4)将丛枝菌根真菌包埋小珠置于干燥箱中干燥；

(5)将干燥后的丛枝菌根真菌包埋小珠转移至10mL离心管中，放置于4℃冰箱中长期保藏。

2.根据权利要求1所述的丛枝菌根真菌保藏方法，其特征在于步骤(1)中，丛枝菌根真菌孢子悬浮液通过以下步骤制备：

A.以三叶草、万寿菊、玉米3种植物为寄主，将丛枝菌根真菌进行盆栽培养，3个月后收获地下部分，置于阴凉处自然风干，得到丛枝菌根真菌扩繁菌剂；

B.采用湿筛倾析法和蔗糖离心法从盆栽扩繁菌剂中分离得到丛枝菌根真菌孢子；

C.将丛枝菌根真菌孢子消毒15min，用无菌水漂洗6～10次得到丛枝菌根真菌孢子悬浮液。

3.根据权利要求1所述的丛枝菌根真菌保藏方法，其特征在于步骤(2)中，所述载体为海藻酸钠载体、明胶和海藻酸钠混合载体、卡拉胶和海藻酸钠混合载体、聚乙烯醇和海藻酸钠混合载体；

在步骤(2)中，海藻酸钠、明胶、卡拉胶和聚乙烯醇的质量浓度分别为1～2％、3～5％、2～3％和8～10％；

在步骤(2)中，所述灭菌操作是将载体在121℃，0.12MPa压力下蒸汽灭菌20min。

4.根据权利要求1所述的丛枝菌根真菌保藏方法，其特征在于步骤(3)中，所述物理挤压方式为将所述菌剂混合物用移液枪挤压；

在步骤(3)中，包埋载体所用交联剂为氯化钙溶液；

在步骤(3)中，所用交联剂质量浓度为2～4％；

在步骤(3)中，包埋小珠的固化时间为2～4h。

5.根据权利要求1所述的丛枝菌根真菌保藏方法，其特征在于步骤(4)中，所述丛枝菌根真菌干燥温度为27℃，干燥时间为48h。

6.根据权利要求1～5所述的丛枝菌根真菌保藏方法，所述的丛枝菌根真菌为摩西球囊霉。