[发明专利]一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒

说明书

本发明提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复位点的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒，涉及生物技术领域，所述引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒均具有如SEQ ID NO.1‑66所示的核苷酸序列。本发明提供的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒可以同时检测多个位点的先天性心脏病微缺失，特异性好，反应灵敏，检测时间短，方法简单、从点突变到大染色体缺失/插入都可以进行检测，成本低廉，临床应用价值高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合、MLPA探针、基因芯片及试剂盒。

背景技术

先天性心脏病(congernital heart diseases，CHD)现已成为广泛发生一种先天性出生缺陷。我国每年约有15-20万先天性心脏病患儿出生，在新生儿中其发病率约为0.7-1.0％，是新生儿非感染性死亡的重要死亡原因之一。先天性心脏病按照有无合并其他畸形大致分为两类，一类为孤立型的先天性心脏病，另一类为综合征型先天性心脏病。综合征型先天性心脏病患儿多呈现出典型的外貌特征，伴或不伴有不同程度智力或生长发育异常及先天性多器官发育畸形等，其常见综合征型先天性心脏病为Down氏综合征，Holt-Oram综合征，努南综合征，DiGeoge综合征等。

近年来，大量流行病学调查研究显示多种因素包括遗传因素，环境因素及其二者的共同作用参与了先天性心脏病的发生，其中，遗传因素与先天性心脏病发生密切相关，其中染色体微缺失和微重复也是胚胎染色体异常的常见类型。染色体微缺失/微重复是指染色体上出现长度为1.5kb-10Mb的缺失或重复。尽管每种微缺失综合征发病率都很低，如较常见的22q11微缺失综合征发生率为1∶4000，但由于临床检测技术的限制，大量的微缺失综合征患者在产前筛查和产前诊断中无法检出，更为重要的是作为胚胎植入前诊断的最主要的样本类型，平衡易位患者的胚胎必须通过分析微重复和微缺失来判定胚胎是否发生异常。因此，如果在试管婴儿技术中能够避免移植有染色体微缺失/微重复的胚胎，将具有很重要的意义。

目前微缺失综合征的诊断技术主要包括高分辨率核型分析、荧光原位杂交、BoBs液态基因芯片检测或微阵列比较基因组杂交，其中，高分辨率核型分析方法仅能发现少部分较大片段的微缺失异常，荧光原位杂交方法特异性好，但是只能进行靶向性诊断。

发明内容

为解决现有技术存在的只能一次检测一个位点的问题，本发明提供一种可以同时快速检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的试剂盒，使用本发明提供的引物、MLPA探针或基因芯片方法简单，成本低廉，临床应用价值高。

为实现本发明的技术目的，本发明一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的引物组合，其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

其中，所述引物组合是基于NIPA2基因、SH2B1基因、GJA5基因、TBX1基因、CRKL基因、MAPKK1基因、EEF2K基因、CDR2基因、MHY11基因和GATA4基因设计的多个引物对，其依次具有SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

为实现本发明的技术目的，本发明另一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的MLPA探针组合，其具有如SEQ ID NO.1-66所示的核苷酸序列。

其中，所述每个MLPA探针上具有荧光标记和通用引物。

其中，所述通用引物对依次具有如SEQ ID NO.67-68所示的核苷酸序列。

为实现本发明的技术目的，本发明再一方面提供一种检测先天性心脏病微缺失或/和微重复的试剂盒，其包括上述的引物组合或上述的MLPA探针组合。

其中，所述试剂盒还包括反应液。

其中，所述反应液包括常规的用于MLPA杂交连接反应的缓冲剂、连接酶、聚合酶以及用于PCR反应的缓冲剂、连接酶、聚合酶或其他相关试剂。