[发明专利]一种基于微生物转化的脱水穿心莲内酯制备方法

权利要求书

1.一种脱水穿心莲内酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1，菌种培养：

将短刺小克银汉霉菌株CGMCC 3.970接种于新鲜斜面培养基上，25℃恒温培养3d；将菌体从斜面培养基转接至装有液体培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为种子液；吸取种子液转接至装有发酵培养基的三角瓶中，振荡培养2d后成为培养液；

其中，所述液体培养基的配方为：去皮煮沸的土豆泥，200g/L；磷酸二氢钾，3g/L；硫酸镁，0.75g/L；葡萄糖，20g/L；维生素B1，0.15g/L；调节pH值至6.0；

所述发酵培养基为在上述液体培养基中再添加40-60μM季膦离子液体，阳离子结构如下：

；其中，n=1或2或7，阴离子为Br^-；或n=3，阴离子为Cl^-；

步骤S2，微生物转化：

向上述发酵培养液中投入穿心莲内酯0.5-1.5g/L，振荡培养3d进行转化；

步骤S3，转化产物提取：

转化终止后将转化液的pH值调节至5.2，静置过夜，抽滤，收集滤液，滤液用乙酸乙酯反复萃取，合并乙酸乙酯萃取液，蒸发回收乙酸乙酯即得转化产物；

步骤S4，高速逆流纯化：

用高速逆流色谱分离纯化转化产物中的脱水穿心莲内酯，溶剂系统为乙酸乙酯-乙醇-水-甲酸，四者体积比为4:1:5:0.05，将该溶剂系统剧烈震荡后静置分层，将上下两相分开，上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集脱水穿心莲内酯对应流份，浓缩干燥即得；其中，高速逆流色谱的仪器的分离管为β值0.5-0.8的多层聚四氟乙烯螺旋管，螺旋管直径2.3mm，工作转速为750r/min，所述高速逆流色谱的流动相流速为1.3mL/min，分离温度为35℃。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基还含有6μM缬氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：振荡培养条件为25℃、135r/min。

4.季膦离子液体在诱导短刺小克银汉霉CGMCC 3.970将穿心莲内酯转化为脱水穿心莲内酯中的应用，所述季膦离子液体的阳离子结构如下：

；其中，n=1或2或7，阴离子为Br^-；或n=3，阴离子为Cl^-。