[发明专利]一种蜗牛活性肽的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物工程领域，具体是一种蜗牛活性肽的提取方法。

背景技术

蜗牛蛋白活性肽是原肉体组织含量最多的蛋白质，是细胞外基质中的主要成分，占蛋白质总量的95%，相当于肉体体重的95%左右；蜗牛蛋白活性肽可为人体所需补充能量，对人体的技能起到修复调整。利用生物酶技术将蜗牛蛋白活性肽转化为小分子多肽，小分子量相容性良好，并能提高生物利用度，因而被作为生物制药、化妆品及保健品的原料或中间体。蜗牛活性肽含有18种氨基酸，还包括含多种干细胞活性分泌因子，因此具有较大的生物学利用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蜗牛活性肽的提取方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种蜗牛活性肽的提取方法，包括以下步骤：

（1）采用活体蜗牛静养一周，清除杂物，挑出足部肉体进行粉碎搅拌为泥状，经过液氮研磨法粉碎至100-200目，得到蜗牛组织，待用；

（2）脱脂：采用脱脂溶剂对上述蜗牛组织进行脱脂，得到脱脂物料，其粗蛋白含量达60%左右；

（3）浸提：采用酸性提取液对上述脱脂物料进行浸提，得到浸出液；

（4）酶解：用胃蛋白酶溶液对上述浸出液进行酶解，酶解后高温灭酶10-20分钟，得到酶解产物；

（5）将上述酶解产物进行一次透析、盐析、纯化，然后进行再次透析、干燥，即得具有特定的小分子肽并且具有一定的生物活性的蜗牛活性肽，该蜗牛活性肽总蛋白含量95%以上。

作为本发明进一步的方案：步骤（2）中，所述脱脂剂包括正丁醇和乙醇溶液；所述正丁醇与乙醇溶液的体积比为（0.05-0.15）：1；每100g蜗牛组织所用的脱脂剂用量为5-10g；步骤（3）中，每100g脱脂物料所用的酸性提取液的用量为1-2L；步骤（4）中，每升浸出液所用的胃蛋白酶溶液的用量为5-20L。

作为本发明进一步的方案：步骤（2）脱脂的条件为：脱脂温度为0-25℃，脱脂的时间为每6-10小时更换脱脂溶剂一次，共更换2-8次；步骤（3）浸提的条件为：浸提温度为0-25℃，浸提时间为10-60小时；步骤（4）酶解的条件为：酶解的温度为10-40℃，酶解的时间为10-40小时。

作为本发明进一步的方案：步骤（5）中一次透析所用的透析介质为0.01-0.03mol/L、且pH值7.0-7.4的Na₂HPO₄溶液，相对于1体积的酶解产物，所述透析介质的用量为10-30倍体积，透析的时间为每6-18小时更换透析介质一次，共更换2-8次；透析所得的透析液离心取沉淀后复溶于5-20倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到透析纯化产物。

作为本发明进一步的方案：然后将透析纯化产物与NaCl固体混合，使得NaCl的终浓度为0.5-1.5mol/L，然后进一步加入NaCl溶液和Tris-HCl溶液的混合溶液中进行盐析，混合溶液pH值为7.2-7.7，其中NaCl溶液浓度为2-3mol/L，Tris-HCl溶液浓度为0.03-0.08mol/L；将盐析所得沉淀复溶于5-20倍体积的0.5-1.5mol/L醋酸溶液中，得到盐析纯化产物。

作为本发明进一步的方案：将盐析纯化产物进行再次透析纯化，所用的再次透析介质为去离子水，且相对于1体积的盐析纯化产物，再次透析所用去离子水的用量为10-30倍体积，再次透析的时间为每6-18小时更换去离子水一次，共更换2-8次；并且，将再次透析所得的透析液于-18℃到-22℃的温度下预冷冻8-20小时，再进行真空冷冻干燥。

一种利用蜗牛活性肽的提取方法得到的蜗牛活性肽。

作为本发明进一步的方案：所述蜗牛活性肽具有以下肽分子量高斯分布模式：分子量为100-1000道尔顿的肽高斯分布面积为26-30%，且分子量在1000-10000道尔顿的多肽高斯分布面积为40-46%。