[发明专利]一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质

权利要求书

1.一种含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：

1）保存液的配制：将副溶血性弧菌标准菌株冻干粉用3%氯化钠碱性蛋白胨水溶解后于36±1 ℃培养8～18 h，后于弧菌显色培养基平板上划线分离，在36±1 ℃恒温培养18～24 h；然后挑取单菌落接种于3%氯化钠碱性蛋白胨水中，36±1 ℃培养8～18 h；吸取500 μL菌液于无菌离心管中，加入500 μL质量浓度为40%的无菌甘油，混合，制成保存液；

2）基质预处理：鱼肉剔除脂肪组织和筋，冷冻干燥后脱水率为76%。然后将脱水鱼肉粉碎至组织细度为50目，采用⁶⁰Coγ辐射灭菌后分装备用；

3）混悬液的配制：按1g鱼肉基质加入9mL无菌水的比例，将预处理后的鱼肉基质与水混合成基质悬液，再加入其3倍体积的保护剂，混合制得混悬液；

4）标准物质的制备：取步骤1）制备的保存液20 μL加于200 mL3%氯化钠碱性蛋白胨水中36±1 ℃下进行培养，并利用多功能酶标仪定时取样测定培养液的OD_{600 nm}值，当OD_{600 nm}为0.335±0.1时停止培养，得新鲜菌液，然后将新鲜菌液按混悬液体积浓度1%加入到步骤3）制得的混悬液中，于恒温振荡器上300r/min摇匀30min，再按2mL/瓶进行分装，其含菌量为4.5×10⁴~6.1×10⁴CFU/mL，最后经冷冻干燥，制得标准物质；

5）检验：将所得标准物质进行菌种鉴定、均匀性验证、定值、稳定性检验，制得成品。

2.根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤1）所得保存液的平均菌数为5.3×10⁸CFU/mL。

3.根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤2）所用鱼肉需先经检测不含抗生素；所用⁶⁰Coγ的辐射剂量为6KGY。

4.根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤3）所述保护剂是将脱脂乳、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮和水按体积比6:10:1:3混合而成。

5.根据权利要求1所述含鱼肉基质的副溶血性弧菌标准物质，其特征在于：步骤4）经冷冻干燥后所得标准物质中含菌量为100~350 CFU/瓶。