[发明专利]一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：

（a）外植体前处理：采集小花山奈的根茎清洗干净，剪掉根茎上的须根后，消毒后晾干；再放入洗净消毒的河沙中，恒温发芽，至根茎芽的芽高为2～5 cm，洗净根茎芽，切掉根茎芽上的茎尖后留下的1～2 cm的芽基部为外植体材料；

（b）芽基部增殖：将消毒好的芽基部外植体接种到增殖培养基上培养，直至外植体基部形成球状；

（c）丛生芽诱导：切割增殖的芽基部，转接到诱导培养基中诱导丛生芽；所述诱导培养基成分为MS、6-苄氨基腺嘌呤3.0～5.0 mg/L、奈乙酸0.01～0.10 mg/L、椰汁10.0～15.0%、蔗糖20～30 g/L、卡拉胶粉9.5～10.0 g/L；

（d）继代增殖：将诱导出的不定芽切掉叶片和茎后留芽基部，继代培养于增殖培养基中继续增殖芽基部；

（e）生根壮苗：当继代丛生芽苗高4～6 cm时，切下接种到生根培养基中，所述生根培养基成分为MS、奈乙酸0.10～0.50 mg/L、香蕉泥10.0～15.0%、活性炭0.5～1.0 g/L、蔗糖20～30 g/L、卡拉胶粉9.5～10.0 g/L；

（f）炼苗移栽：当生根培养基上的苗高6～8 cm时，在温室自然光照下炼苗7～10 d，取出瓶苗，洗净根部培养基，消毒后，移栽到泥炭类基质中，保持通风透气，湿度在70～85%，温度在20～32℃，自然光照条件培养后得移栽苗；

步骤（b）和步骤（d）所述的增殖培养基成分为MS、6-苄氨基腺嘌呤8.0～10.0 mg/L、奈乙酸0.01～0.10 mg/L、椰汁10.0～15.0%、蔗糖20～30 g/L、卡拉胶粉9.5～10.0 g/L。

2.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤（a）所述的消毒后晾干的消毒是将小花山奈的根茎放入质量浓度0.1～0.3%的多菌灵粉剂溶液中浸泡消毒30～40 min，然后再放入质量浓度0.1～0.3%的高锰 酸钾溶液浸泡消毒30～40min；步骤（a）所述的洗净消毒的河沙是将河沙先用灭菌水冲洗3～4次，再用质量浓度0.1～0.3%的高锰 酸钾溶液浸泡消毒3～5 h，然后室温晾干。

3.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤（a）所述的恒温发芽是在培养箱中30～33℃下进行。

4.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：以质量百分比浓度计，步骤b）所述外植体的消毒是先用0.1～0.3%高锰酸钾溶液浸泡根茎芽30～40min，再在自来水下反复冲洗根茎芽30～40 min；晾干表面水分后，在超净工作台上，切掉根茎芽上的茎尖，留2～3 cm高的根茎芽基部，用棉球蘸取70%酒精擦拭芽基部，最后用0.1～0.2%升汞溶液消毒12～15 min，灭菌水冲洗4～5次，切掉距离芽基部两头各0.3～0.5 cm的部分，留1～2 cm的根茎芽基部，并将根茎芽基部接种到芽基部增殖培养基中。

5.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤（f）中如果温度高于32℃，用风机和水帘降温。

6.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述增殖培养基、诱导培养基和生根培养基的pH都为5.6～5.8；培养基灭菌条件为125℃，30～40 min。

7.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤（b）、步骤（c）、步骤（d）和步骤（e）培养的温度为25～30 ℃，光照强度为2000～2300 lx，光照时间控制为14 h/d。

8.根据权利要求1所述的小花山奈的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤（f）所述消毒使用百菌清溶液消毒，百菌清溶液的浓度为0.1～0.3%，消毒浸泡的时间为30～40min。