[发明专利]一种D-扁桃酸脱氢酶、基因、基因工程菌及其应用

权利要求书

1.包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的基因工程菌在苯乙酮酸的生物合成中的应用。

2.一种苯乙酮酸的生物合成方法，所述方法包括如下步骤：

将包含如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的基因工程菌单菌落接种至4 mL含有

50μg/mL卡拉霉素的LB液体培养基中，在37℃、220 rpm下培养过夜；将过夜培养的产物用移液器按2%的接种量接种到100mL的LB液体培养基中；然后，置于37℃下、200rpm培养2.5h，最后加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG水溶液，置于16℃下、220 rpm培养20h，得到发酵液；

将D-扁桃酸加入到所述发酵液中，使D-扁桃酸的终浓度为1~100 mM，维持反应温度为4~50℃，反应2~48h，反应过程中用HPLC法检测苯乙酮酸的生成量，待转化率达到90%以上时，加入活性炭，在20~50℃下反应10~15min吸附色素，抽滤去除活性炭及吸附在活性炭上的菌体，用等体积的乙酸乙酯萃取1~3次，旋转蒸干后用硅胶柱进行分离纯化，获得色谱纯的苯乙酮酸。