[发明专利]一种可溶性重组蛋白CTA-CD154及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种可溶性重组蛋白CTA‑CD154，其核苷酸序列及氨基酸序列。本发明还公开了可溶性重组蛋白CTA‑CD154的制备方法。本发明还公开了该可溶性重组蛋白CTA‑CD154的应用。该可溶性重组蛋白CTA‑CD154能够作为一种新型的免疫增强剂，且能够特异性的靶向DC细胞，显著增强机体的免疫应答反应，而且融合后的免疫增强CTA‑CD154作用显著高于单独成分的免疫增强作用。

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种可溶性重组蛋白CTA-CD154及其制备方法和应用。

背景技术

黏膜免疫是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线，增强黏膜免疫效力是提高机体抵抗力的有效方式之一。所以越来越多的研究学者探索如何提高机体粘膜免疫效力，有学者发现霍乱毒素(cholera toxin,CT)具有较好的黏膜佐剂活性，它是由1个A和5个相同的B亚单位组成的多亚单位大分子。经大量研究证实霍乱毒素A亚单位(CTA)能使少量的抗原诱导机体产生早期、高效、持久的免疫应答；其作为黏膜免疫增强剂能够有效增强机体的黏膜免疫反应，能够显著提高相关抗原刺激产生的IgG抗体水平。但CTA作为免疫增强剂不具有特异性靶向DC细胞的功能，因此，其发挥免疫增强作用受到一定的限制。

树突状细胞(Dendritic Cells,DC)是近年来倍受人们关注的专职抗原呈递细胞(Antigen presentingCells,APC)，能摄取、加工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。T淋巴细胞在免疫系统的激活过程中发挥了重要的作用，其表面受体CD40与CD154相互作用通过树突状细胞的活化及天然杀伤细胞的产生来促进细胞介导的免疫。CD154又被称为CD40L，是CD40的配体，也是一种II型跨膜糖蛋白。作为关键刺激分子表达于CD4⁺T细胞表面，活化后，也能在CD8T细胞、B细胞、巨噬细胞、肥大细胞、树突状细胞表面表达。CD154作为一种配体与其受体结合后能够促进T、B细胞的分化、促进巨噬细胞活化，并且具有特异性地靶向DC细胞的功能，在体液和细胞免疫应答中具有重要的作用。因此，设计一种靶向DC免疫增强剂，为后续试验研究提供新的思路。

发明内容

技术问题：本发明所要解决的技术问题是提供了一种用于编码可溶性重组蛋白CTA-CD154的DNA分子。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种可溶性重组蛋白CTA-CD154。

本发明还要解决的技术问题是提供了含有所述的可溶性重组蛋白CTA-CD154的DNA分子的重组表达载体、转基因细胞系或转基因重组菌。

本发明还要解决的技术问题是提供了一种免疫增强剂。

本发明最后要解决的技术问题是提供了所述的免疫增强剂在制备疫苗方面的应用。

技术方案：为了解决上述技术问题，本发明公开了一种用于编码可溶性重组蛋白CTA-CD154的DNA分子，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明内容还包括一种可溶性重组蛋白CTA-CD154，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明内容还包括含有所述的可溶性重组蛋白CTA-CD154的DNA分子的重组表达载体、转基因细胞系或转基因重组菌。

其中，所述的重组表达载体是将所述的DNA分子插入到大肠杆菌表达载体中得到含有可溶性重组蛋白CTA-CD154的DNA分子的重组表达载体。

本发明内容还包括一种转基因重组菌，所述重组菌是将所述的重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到转基因重组菌。

本发明内容还包括可溶性重组蛋白CTA-CD154的制备方法，包括以下步骤：