[发明专利]一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及同源四倍体鉴定技术领域，具体涉及一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法。

背景技术

木薯(ManihotesculentaCrantz)是大戟科(Euphorbiaceae)木薯属(Manihot)植物，耐旱抗贫瘠，广泛种植于非洲、美洲和亚洲等100多个国家和地区，被誉为“淀粉之王”，是世界近六亿人赖以生存的粮食。木薯用途广泛，除作粮食外，还是重要的工业原料，如木薯块根淀粉、干片可制变性淀粉、酒精和山梨醇等，而这些产品又是食品、医药、纺织、造纸等产业的重要原料。

木薯为二倍体，染色体数目为2n＝36，是无性繁殖、收获营养体(木薯块根)的作物。基于此，木薯四倍体易于诱导获得，并能通过无性繁殖保持同源四倍体的稳定性，这有利于高效地利用四倍体的特点提高收获产量和植株抗性。但在利用四倍体木薯前，有必要对木薯植株进行同源四倍体鉴定，明确其同源四倍体为四倍体后方可利用四倍体木薯进行进一步研究或生产。

现今鉴定木薯同源四倍体的方法多为：(1)表型鉴定法。优点为鉴定速率高，耗费人力物力较少；缺点为准确率较低。(2)染色体鉴定法。优点为结果准确可靠；缺点为费时费力，步骤繁琐，对实验条件和操作水准要求较高。(3)流式细胞仪鉴定法。优点为鉴定效率高，结果准确；缺点为实验仪器较为昂贵，鉴定成本过高，且对操作水准要求较高，部分试剂具有毒性，长期接触有害身体。现有技术并没有一种成本低的快速鉴定木薯同源四倍体的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法。本发明提供的鉴定方法成本低、速度快、准确率高，能够实现木薯同源四倍体的高效快速检测。

本发明提供了一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法，包括以下步骤：

1)用卡诺固定液浸泡木薯叶片，得到固定后的木薯叶片；

2)取步骤1)得到的固定后的木薯叶片的下表皮在碘-碘化钾染液中进行染色，得到染色后的下表皮；

3)将步骤2)得到的染色后的下表皮进行显微观察，对保卫细胞内的叶绿体进行计数，若视野范围内的超过90％的保卫细胞内叶绿体数目≥7，则判定木薯为同源四倍体，若视野范围内的超过90％的保卫细胞内叶绿体数目＜7，则判定木薯为二倍体。

优选的是，步骤1)所述木薯叶片选择高度为0.6～1.0m的木薯植株上的从顶端数第5～7片完全展开叶。

优选的是，步骤2)中下表皮由木薯叶片撕取得到，所述撕取方法包括以下步骤：避开叶脉处，在叶片下表皮划一十字，掀起十字一角，撕下下表皮。

优选的是，步骤1所述浸泡的时间为24h以内。

优选的是，步骤2)所述染色的时间为30～120s。

优选的是，步骤3)来源于同一木薯植株的叶片，至少观察3个视野。

本发明提供了一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法。本发明提供的鉴定方法通过对木薯下表皮保卫细胞内的叶绿体进行计数，实现木薯同源四倍体的鉴定，操作简便，成本低，准确率高，能够实现木薯的快速鉴定。

附图说明

图1为本发明实施例1提供的木薯品种新选048保卫细胞内叶绿体数目示意图；

图2为本发明实施例2提供的木薯品种华南205保卫细胞内叶绿体数目示意图；

图3为本发明实施例3提供的木薯品种南植199保卫细胞内叶绿体数目示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种木薯同源四倍体的快速鉴定方法，包括以下步骤：

1)用卡诺固定液浸泡木薯叶片，得到固定后的木薯叶片；

2)取步骤1)得到的固定后的木薯叶片的下表皮在碘-碘化钾染液中进行染色，得到染色后的下表皮；

3)将步骤2)得到的染色后的下表皮进行显微观察，对保卫细胞内的叶绿体进行计数，若视野范围内的超过90％的保卫细胞内叶绿体数目≥7，则判定木薯为同源四倍体，若视野范围内的超过90％的保卫细胞内叶绿体数目＜7，则判定木薯为二倍体。

本发明用卡诺固定液浸泡木薯叶片，得到固定后的木薯叶片。在本发明中，所述木薯叶片优选选择高度为0.6～1.0m的木薯植株上的从顶端数第5～7片完全展开叶。本发明优选选取叶片完整，无病虫害的叶片。本发明选择的叶片为成熟叶片，叶绿体数目达到最大值，叶片幼嫩，叶绿体生长不成熟，数目不准确，叶片过老，叶绿体降解，也会影响检测结果。