[发明专利]一种获得高纯度腺相关病毒载体的纯化工艺

权利要求书

1.一种大规模获得高纯度腺相关病毒载体的工艺方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤A：收集腺相关病毒载体的细胞培养上清，除去细胞碎片，澄清后的样品用于层析纯化；

步骤B：通过阳离子柱对腺相关病毒载体进行捕获和初步纯化；

步骤C：通过吸附凝胶过滤柱进行中度纯化；

步骤D：用阴离子交换柱进行精纯；

步骤E：将收集的腺相关病毒载体液加入超滤系统进行浓缩。

2.权利要求1的方法，其特征在于，所述步骤A中的细胞培养上清包括微载体细胞培养上清、贴壁培养上清和悬浮细胞培养上清。

3.权利要求1的方法，其特征在于，所述步骤A中采用离心或20-0.1 μm的深层过滤除去细胞碎片，再用0.22-0.45 μm滤器过滤。

4.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤B中，阳离子交换层析介质的配基为Sulphopropyl (SP)的强阳离子交换基团。

5.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤B中，阳离子交换层析的平衡缓冲液为电导在5-10 mS/cm、pH 5-7范围内。

6.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤B中，阳离子交换层析的洗脱缓冲液为电导在5-40 mS/cm、pH 5-9范围内。

7.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤C中，层析介质具有体积排阻和吸附双重功能的多模式介质。

8.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤C中，层析介质的体积排阻尺寸在50 kDa至700 kD之间。

9.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤C中，平衡缓冲液为电导在5-40 mS/cm、pH 5-9范围内。

10.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤D中，层析介质的配基为Quaternary ammonium (Q)的强阴离子交换基团。

11.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤D中，阴离子交换层析的平衡缓冲液为电导在5-10 mS/cm、pH 7-9范围内。

12.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤D中，阴离子交换层析的洗脱缓冲液为电导在10 -100 mS/cm、pH 7-9范围内。

13.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤E中，超滤膜的排阻尺寸在30 kDa至300 kD之间。

14.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤E中，超滤模式包括离心浓缩和切向流过滤。

15.权利要求1的方法，其特征在于所述步骤E中，超滤膜的形式包括中空纤维超滤膜和平板超滤膜。

16.前述权利要求任一项方法，其用于纯化2型腺相关病毒载体。